RAF信号通路

背景 心血管疾病（CVD）是常见病和多发病，患病率和死亡率呈快速上升趋势。动脉粥样硬化（AS是缺血性CVD的病理基础，研究表明心外膜脂肪组织（EAT）通过分泌外泌体（EXO）和生物活性物质促进AS进展，但其作用机制仍需进一步研究。目的 通过生物信息学方法挖掘冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）患者EAT中的关键基因，探讨免疫细胞浸润情况，联合CAD患者EXO间差异表达基因（DEGs）推测EAT来源EXO间DEGs并进行验证，从细胞及分子水平上探讨EAT在CAD疾病过程中的作用机制。方法 从基因表达综合数据库（GEO）中下载关于EAT的数据集GSE64554、GSE120774，根据临床信息将EAT的测序数据分为CAD组和健康对照组，使用R语言及相关软件包进行生物信息学分析。首先使用R语言筛选CAD组与健康对照组EAT间DEGs，并进行GO富集分析和KEGG通路富集分析，构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，评估所选基因的生物学功能及可能参与其调控的转录因子。构建GSE64554数据集中EAT的加权基因共表达网络（WGCNA），获取同CAD表型相关的基因模块，将所获EAT间DEGs与模块内hub基因取交集获得关键基因，采用Cibersort反卷积算法对EAT组织的免疫细胞浸润情况进行分析。通过exoRbase数据库获取CAD组与健康对照组血液EXO间DEGs,CAD组和健康对照组EAT间DEGs与EXO间DEGs取交集作为CAD的诊断、治疗标志物，收集临床样本通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对其进行验证。对所选基因进行GO/KEGG富集分析和MetascaEndomyocardial biopsype富集分析。结果 共筛选出CAD组与健康对照组EAT间DEGs 1 511个，其中表达上调的基因956个，表达下调的基因555个。通过对CAD表型相关的模块内枢纽基因与EAT间DEGs取交集获得EAT在CAD发生、发展中的关键基因DDX47、FEM1C、NOL11、SRP54、ABI1、PATL1、BNIP2、C1orf159、CHCHD4。免疫细胞浸润分析显示，CAD组EAT中幼稚CD4+T细胞表达丰度升高而静息树突细胞表达丰度减低（P<0.05）。筛选获得CAD EXO间DEGs 1 658个，其中表达上调的基因278个，表达下调的基因1 380个，EAT间DEGs与EXO间DEGs取交集，共获得129个基因，选取表达丰度较高的BPI、BIINCB018424半抑制浓度RC5、CXCL12、RNASE1、F2R作为CAD患者潜在诊断、治疗标志物，经qRT-PCR验证结果显示，CAD组与健康对照组比较BPI、BIRC5、CXCL12和RNASE1的mRNA水平升高（P<0.05）,F2RmRNA水平下降（P<0.05）。GO/KEGG富集分析显示EAT间DEGs主要富集于细胞质基质、MHC蛋白复合物、RNA降解、抗原加工和呈递等Liraglutide采购，构建PPI网络，通过Cytoscape软件CytoHubba插件MCC算法获得连接度最高的基因RPS27A。Metascape富集分析显示DEGs主要富集于细胞对DNA损伤刺激反应、RNA代谢、调节细胞对压力的反应、适应性免疫系统等，TRRUST数据库预测CIITA转录因子可能参与了EAT间DEGs的调控。结论 （1）EAT可能通过促炎和免疫途径参与CAD的发生和发展，DDX47、FEM1C、NOL11、SRP54、ABI1、PATL1、BNIP2、C1orf159、CHCHD4、RPS27A可能作为关键基因并发挥重要作用。（2）CAD患者EAT中幼稚CD4+T细胞表达丰度升高而静息树突细胞表达丰度减低。（3）BPI、BIRC5、CXCL12、RNASE1、F2R可能由EAT分泌并可作为CAD的诊断、治疗标志物。

目的 分析我院肿瘤患者在使用程序性细胞死亡蛋白-1/受体配体-1(PD-1/PD-L1)抑制剂期间的不良反应发生情况。方法 通过HIS系统及不良反应上报系统回顾性调查2019年1月1日～2022年5月1日在本院接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗的肿瘤患者，记录患者发生免疫性相关不良反应的信息，并进行相关性分析。结果 抽查379例使用了PD-1/PD-L1抑制剂的患者，共发生了66次免疫相关性不良反应，常见类型包括免疫性肺炎(3.69%)、免疫性肝炎(2.90%)和免疫性心脏毒性(2.11%)等，输液反应虽不是免疫相关性不良反应，但发生率同样较高(2.37%)。另外，Vorinostat试剂在所监测的药物中，不良反应发生率较高的PD-1抑制剂有帕博利珠单抗(55.56%)、纳武利尤单抗(23.53%)、卡瑞利珠单抗(14.38%)、信迪利单抗(1Postmortem biochemistry3.58%)。结论 PD-1/PD-L1抑制剂引起的不良反应总体发生率不高，但各PD-1/PD-L1抑制剂之间免疫相关性不良反应的发生率和不同的不良反应发生率均有一定的差异，在临床选Ceralasertib体内药时应根据患者情况选择合适的PD-1/PD-L1抑制剂及做个体化不良反应监测。

目的 总结生产抗生素中生物技术的应用，Naporafenib生产商并预测从哪些方面可以优化生产，旨在为提高抗生素产量、优化质量、降低成本、减轻环境污染提供一些策略和思路。方法 通过查阅文献，总结目前国内外已有的各种抗生素生产技术与应用到生产中的优化策略，并根据已发表的一些基础生物学研究成果，展望有潜力应用到抗生素工业，改良生产技术、优化产品的新策略、新思路。结果 目前应用在抗生素生产中的生物技术主要是发酵工程、酶工程、细胞工程和基因工程，有很多研究Trichostatin A小鼠成果尚未投入使用。对于新兴的抗生素替代品的研究，植物次生代谢产物、海洋天然产物和计算生genetic assignment tests物学新药研发的成果具有应用前景。结论 抗生素生产的优化离不开现代生物技术的合理应用，选取一至数种适宜的优化方法对产品的产量、质量、效果的提升具有较好的前景。

目的 分析腋窝临床淋巴结阳性乳腺癌患者的腋窝淋巴结超声特征，探索超声特征与腋窝淋巴结转移负荷及患者预后的相关性。方法 研究入组2009年1月至2020年12月于本中心接受腋窝淋巴结清扫术的临床淋巴结阳性乳腺癌患者，分析可预测腋窝淋巴结转移负荷的临床病理指标和超声指标。利用多因素Cox回归分析影响患VX-445者预后的超声指标。结果 共纳入1 055例乳腺癌患者，其中低淋巴结负荷（1～2枚淋巴结转移）398例（37.7%），高淋巴结负荷（≥3枚淋巴结转移）657例（62.3%）。多因素分析显示，患者年龄≥55岁（OR=1.56,95%CI:1.20～2.02,PEntinostat化学结构=0.001），超声肿瘤大小<20.0 mm(OR=1acute infection.54,95%CI:1.14～2.09,P=0.005)、超声淋巴结长径<20.0 mm(OR=2.03,95%CI:1.48～2.79,P<0.001)、超声淋巴结短径<8.6 mm(OR=1.41,95%CI:1.06～1.89,P=0.019)和超声可疑淋巴枚数1～2枚（OR=2.74,95%CI:1.63～4.61,P<0.001）与低淋巴结负荷独立相关。孕激素受体和淋巴结长径是DFS(HR=2.06,95%CI:1.21～3.50,P=0.008;HR=1.66,95%CI:1.15～2.40,P=0.007)和OS(HR=4.53,95%CI:2.18～9.59,P<0.001;HR=3.49,95%CI:1.96～6.20,P<0.001)的独立预测因素。结论 超声特征有助于预测腋窝临床淋巴结阳性乳腺癌患者的淋巴结转移负荷及预后，指导后续个体化治疗。

目的探讨半边旗二萜化合物5F对人结直肠癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响及其作用机制。方法采用MTT法VE-822试剂检测6.25、12.5、25、50、100μmol·L~(-1)的5F对结直肠癌细胞SW480、HCT116的增殖抑制作用。Hoechst 33342染色观察5F作用结直肠癌细胞后细胞形态学的变化。吖啶橙染色观察5F对结直肠癌细胞酸性小泡细胞器的影响。Western blot分析5F对结直肠癌细胞相关凋亡、自噬蛋白的影响。E7080价格另外，用5F单独给药以及与自噬抑制剂氯喹联合用药检测其对自噬标志蛋白LC3、凋亡相关蛋白表达和细胞存活情况的影响。结果与空白组相比，5F处理的SW480、HCT116细胞活力均显著降低（P<0.05,P<0.01）。Hoechst33342染色显示5F处理SW480、HCT116后细胞核固缩，表现为明显的亮蓝色，呈凋亡特征。随着5F浓度的增加，Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP、Bax蛋白表达显著增加（P<0.05,P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著减少（P<0.01);Caspase广谱抑制剂z-VAD-fmk与5F联用可削弱Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达（P<0.01）。25、50μmol·L~(-1)的5F分别处理结直肠癌细胞后，细胞内被吖啶橙染成红色的酸性小泡有增加趋势；100μmol·L~(-1)的5F处理结直肠癌细胞后，代表酸性小泡的红色荧光反而减少。低浓度的5F处理结直肠癌细胞后LC3-Ⅱ蛋白表达增加（P<0.01），而100μmol·L~(-1)的5F组表达反而减少（P<Iodinated contrast media0.01）。与50μmol·L~(-1)的5F组相比，同浓度的5F联合氯喹处理组，LC3-Ⅱ蛋白表达增加（P<0.01);Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达明显减少（P<0.01）。与50μmol·L~(-1)的5F组比，同浓度的5F联合氯喹处理结直肠癌细胞后细胞存活率增加（P<0.01）；与100μmol·L~(-1)的5F组比，同浓度的5F联合氯喹处理结直肠癌细胞后细胞存活率几乎不变。结论5F可通过增加Bax蛋白，降低Bcl-2蛋白，促进结直肠癌细胞凋亡。低浓度的5F还可诱导结直肠癌细胞发生自噬，发挥促凋亡作用；高浓度的5F主要诱导结直肠癌细胞凋亡。

目的：通过分析民航飞行员心血管病危险分层及其影响因素，探讨飞行员冠心病初筛纳入医学标准之外的其他危险因素的必要性。方法：选取2021年7—12月在某体检中心体检的≥40岁民航飞行员230人作为研究对象，汇总病史、体格检查、实验室检查及颈部血管超声检查，采用SPSS 17.0软件对数据进行统计分析。结果：按血脂异常心血管病危险分层划分，中低危、高危和极高危人群占比分别为76.09%、15.65%和8.26%。除血脂异常心血管病危险分层涉及的危险因素外，甘油三酯、血尿酸、身体质量指数、颈动脉内中膜增厚或颈动脉斑块形成在心血管病危险分层分布比较，差异有统计学意义（χ~2值分别为6.3selleck合成4、13.01、18.67、8.00,P值Hydroxyapatite bioactive matrix均<0.05）。结论：飞行员冠心病初筛时将现行医学标准之外的吸烟、低高密度脂蛋白胆固醇、高尿酸血症和超重纳入危险因素，有助于对高危和极高危人群的早期识别和确认细节干预。

目的 探讨基于双源CT双能量冠状动脉CTA在冠心病诊疗中的应用价值。方法 选择2021年5—11月徐州市铜山区人民医院心血管内科收治的72例疑似冠心病患者，对所有患者采用双源CT双能量冠状动脉CTA技术，以冠状动脉造影检查为金标准，观察双源CT双能量冠selleck PEG300状动脉CTA的狭窄情况。结果 双源CT双能量冠状动脉CTA的敏感性为84.3%(54/64)、特异性为75.0%(6Galunisertib配制/8)、漏诊率为15.6%(10/64)、误诊率为25.0%(2/8)；冠状动脉造nerve biopsy影技术与双源CT双能量冠状动脉CTA技术进行诊断后，冠状动脉造影检查出前降支25例、回旋支13例、左冠状动脉主干11例、右冠状动脉11例，CTA检查出前降支24例、回旋支12例、左冠状动脉主干10例、右冠状动脉9例，差异无统计学意义（χ~2=0.031、0.048、0.054、0.298,P=0.860、0.825、0.815、0.584）；双源CT双能量冠状动脉CTA显示冠状动脉狭窄以轻度为主，占比40.0%(22/55)，中度和重度占比50.9%(28/55)，双源CT双能量冠状动脉CTA与冠状动脉造影的诊断差异无统计学意义（P>0.05）。结论 通过对疑似冠心病患者进行双源CT双能量冠状动脉CTA成像，能清晰、精准地显示冠状动脉解剖学形态、变异、狭窄程度及判定斑块的性质，对易损斑块的诊断具有较高的特异性与敏感性，为冠心病的临床筛查、诊断及治疗方案的选择提供了有效的参考依据，建议在临床中进一步推广并应用。

鹅星状病毒(Goose astrovirus,GAst V)作为一种新发病原,可导致雏鹅全身性内脏痛风,表现为高感染率和高死亡率。2016年暴发以来,给中国养鹅业带来了严重损失。刺突蛋白(Spike)位于鹅星状病毒表面,是重要的抗原蛋白,可诱导宿主的免疫反应,并介导病毒粒子与细胞表面受体的结合,因此Spike蛋白是诊断试剂开发和药物筛选的重要靶标。1.鹅星状病毒Spike蛋白的表达与纯化首先将构建好的p ET-28a-Spike质粒转化到E.coli BL21感受态细MK-1775临床试验胞,经菌液PCR、测序后获得序列正确的阳性菌株。原核表达条件优化后,最终选择在16℃条件下加入终浓度为1 m M IPTG过夜诱导,SDS-PAGE结果显示可溶性Spike蛋白成功表达。使用镍离子亲和层析技术纯化获得了Spike蛋白,经SDS-PAGE、Western-blot鉴定,获得了高纯度(95%)、高浓度(1.5mg/m L)的Spike蛋白。2.鹅星状病毒Spike蛋白单克隆抗体的制备通过Spike蛋白免疫BALB/c小鼠,细胞融合,亚克隆,采用ELISA、IPMA共筛选到3株阳性单克隆细胞,分别为:1A5、2B4、12E6。经Western-blot、IFA鉴定,3株单克隆抗体均与Spike蛋白具有良好的反应,其中2B4、12E6与GAst V发生反应。亚型鉴定结果显示单抗12E6、2B4为Ig G2b亚类,单抗1A5为Ig G2a亚类;轻链均为κ链。敏感性结果显示,抗体效价在1:51 200以上。依据GAst V XX株Spike序列合成15个氨基酸的25个重叠肽(包含7个氨基酸的重叠量),ELISA、Dot-blot结果显示单抗1A5识别的表位为(EP16)ELRNRLNIADGDYVI,单抗2B4识别的表位为(EP21)AGDSNPGETFQNFKM多肽,且均为线性B细胞表位。3.鹅星状病毒Spike蛋白亲和肽的虚拟筛选以火鸡星状病毒2型Spike蛋白的晶体结构为模板,利用SWISS-MODEL进行同源建模,获得GAst V Spike蛋白的三维结构。基于分子对接技Pexidartinib价格术进行计算机虚拟筛选,运用SYBYL软件选定Spike蛋白的C端部分区域为活性口袋来建立多肽库,再利用Surflex-Dock/SYBYL将库中的多肽配基与选定口袋进行对接,最后通过一致性评分函数(Cscore)综合评估对接结果,筛选出30条特异识别GAst V Spike蛋白的多肽,为后续的抗病毒研究Organic media奠定了基础。4.鹅星状病毒抗病毒亲和肽的筛选与鉴定利用IPMA初步筛选到3条抑制GAst V增殖的多肽,结合多肽的细胞毒性结果,最终筛选到多肽AP21。亲和性鉴定结果显示多肽AP21可以与Spike蛋白特异性结合,Western-blot、IFA、TCID_(50)结果显示亲和肽AP21对GAst V具有显著的抗病毒活性,为GAst V抗病毒药物开发奠定了基础。抗病毒靶点分析结果显示,AP21作用的靶点位于Spike蛋白结构的侧面,具有特定的空间构象。

贵金属纳米团簇由于其特殊的尺寸使其具备了与其它较大尺寸的纳米颗粒不同的物理和化学性能。例如特殊的光学性能及类酶催化活性,同时以生物分子模板制备的贵金属纳米团簇由于其表面具有丰富的官能团,使得制备的贵金属纳米团簇材料具有易于修饰的特点。从尺寸上来说,贵金属纳米团簇材料的尺寸通常不超过2 nm,分子数目是由几十个到上百个数量不等的贵金属原子按照一定规律聚集而成。制备方法主要聚焦于物理合成方法和化学合成方法。而在化学合成法中以生物分子模板制备的贵金属纳米团簇材料具有操作简便﹑水溶性好﹑重现性高等优点。除此之外,贵金属纳米团簇材料的生物相容性好﹑毒性低﹑具备可调控的荧光性能等多类优点使其被广泛使用于医学成像探针﹑肿瘤细胞成像、抗菌﹑抗病毒等基础生物医学和分析领域。另外基于其优良的光学性能,贵金属纳米团簇也可以应用于离子检测。前期我们实验室的研究发现贵金属纳米团簇具有良好的类酶催化活性,可实现肿瘤细胞的催化显色成像。因此本课题结合前期实验室实验结果以及相关报道的传统四氧化三铁的类酶催化活性,我们在本文中报道了以牛血清白蛋白(BSA)为模板通过生物矿化法合成了一种金和铁双元素整合生物纳米探针(BSA-Au-Fe NCs),并对其类酶催化活性以及肿瘤细胞成像应用进行了探究。除此之外,我们在本课题中还报道了利用谷胱甘肽(GSH)为模板合成了具有荧光性能的金纳米团簇探针(GSH-Au NCs),并利用金纳米团簇的荧光淬灭实现了对两种稀土离子的检测并对荧光淬灭机理进行了探究。具体研究内容如下:1.基于牛血清白蛋白(BSA)为模板通过生物矿化法制备整合纳米探针(BSA-Au-Fe NCs)及其对肿瘤细胞多模式成像的应用。以牛血清白蛋白(BSA)为模板,合成了具有荧光信号及类酶催化活性的金铁双元素整合纳米探针(BSA-Au-Fe NCs),并对其光Baf-A1浓度学性能及类酶催化活性进行了表征。表征的结果发现制备的BSA-Au-Fe NCs具有良好的荧光特性,其最佳激发峰为λ_(ex)=536 nm,最佳发射峰为λ_(em)=673 nm。通过高分辨www.selleck.cn/products/cobimetinib-gdc-0973-rg7420透射电镜(HRTEM)得到的数据我们发现制备的整合纳米探针具有很好的分散性及较小的尺寸。粒径统计结果显示整合探针的尺寸为3.85±0.17 nm,同时动态光散射结果显示制备的整合纳米探针粒径在4.2 nm左右。同时实验通过体外TMB催化实验探究了材料的体外催化活性并优化了催化的实验条件。结果显示制备的整合纳米探针具备优良的体外类酶催化活性。为了进一步探究整合纳米探针的细胞成像潜力,实验对整合纳米探针的生物安全性进行了初步评价。我们通过CCK-8体外细胞毒性实验﹑溶血实验以及死/活细胞染色等实验对合成的整合纳米探针的生物安性进行了评价。结果显示即使整合纳米探针中的金的浓度达到200μM时,对三种实验细胞系也没有产生明显的细胞毒性。实验选取A549肿瘤细胞来研究整合纳米探针的多模式成像能力,实验分别设置荧光成像实验﹑普鲁士蓝实验组及催化显色成像实验组。结果显示制备的整纳米合探针具有良好的细胞荧光成像能力。同时通过普鲁士蓝染色实验及DAB催化显色实验进一步验证了对细胞的标记成像能力。为了验证制备的整合纳米探针在实际中的是否可以通过受体诱导效应提升实验细胞对整合纳米探针的摄取量以提高其细胞成像效果。实验设置LHRH多肽偶联整合纳米探针组,并对标记细胞实现光学成像﹑普鲁士蓝染色及催化显色。结果显示LHRH多肽偶联整合纳米探针实验组能明显提高实验细胞对整合纳米探针的摄取率,进而更有效地实现对实验细胞的多模式成像。综述以上实验结果,我们初步non-medicine therapy确认制备的整合纳米探针具有良好的多模式成像能力及生物安全性,可以作为一种肿瘤细胞成像的辅助载体,同时也是一类可以应用于生物纳米医学的新型纳米材料。2.金纳米团簇(GSH-Au NCs)荧光淬灭实现对镧、铕离子的检测及相关淬灭机理的探究。以谷胱甘肽(GSH)为模板制备了具有橙红色荧光发射(λ_(ex)=420 nm,λ_(em)=600 nm)的金纳米团簇(GSH-Au NCs)。实验通过高分辨透射电镜(HRTEM)﹑动态光散射(DLS)等表征手段对金纳米团簇的形貌及尺寸进行了表征。通过荧光光谱及紫外吸收光谱对金纳米团簇的光学性能进行表征。高分辨透射电镜(HRTEM)数据显示制备的金纳米团簇在溶液中具有很好的分散性且大小均一。粒径数据统计的结果显示金纳米团簇的尺寸为1.95±0.19 nm,同时动态光散射的数据显示金纳米团簇(GSH-Au NCs)的粒径在2.1 nm左右。我们通过对制备材料不同时间点的紫外吸收光谱和荧光光谱进行追踪。结果显示我们制备的金纳米团簇具有很好的稳定性。TMB体外催化显色实验的结果显示我们制备的金纳米团簇的自身具备很好的类酶催化活性。不同离子荧光淬灭的实验结果显示镧离子(La~(3+))、铕离子(Eu~(3+))对金纳米团簇的荧光存在明显的淬灭效果。于是我们利用制备的金纳米团簇作为检测探针应用于这两种稀土离子的检测。根据Stern-Volmer淬灭方程得到了不同温度下两种稀土离子的淬灭常数。实验结果显示镧离子(La~(3+))、铕离子(Eu~(3+))和金纳米团簇(GSH-Au NCs)之间分别为动态淬灭和静态淬灭。且在一定浓度范围内两种稀土离子浓度对金纳米团簇探针的荧光淬灭程度具有良好的线性关系。本课题中利用金纳米团簇(GSH-Au NCs)的荧光淬灭作为检测探针来检测两种稀土离子的方法具备成本低,灵敏度高而且操作简单等优点。该方法同时也提供了一种很好的简易且灵敏检测稀土离子(La~(3+)、Eu~(3+))的新方法。

目的 探讨大分割与小分割X线放疗方案对乳腺癌MCF-7细胞长链非编码RNA GATA6反义RNA 1(GATA6-AS1)基因表达的影响。方法 给予MCF-7细胞4Gy X线照射，分为小分割组(每次0.5 Gy，共8次)、大分割组(每次2 Gy，共2次)，以未照射组为对照组。利用CCK-8VX-765采购实验检测各组MCF-7细胞的增殖能力，流式细胞仪检测各组MCF-7细胞凋亡，q RT-PCR法检测各组MCF-7细胞GATA6-AS1基因表达变化，进一步通过Westernblot法检测其邻近基因表达产物GATA6的表达情况。结果 通过CCK-8实验发现，X线照射能够抑制MCF-7细胞的增殖，大分割组MCF-7细胞增殖抑制较小分割组更明显，72 h抑制率可达(57.0±8.86)%，而小分割组仅为Biokinetic model(25.0±4.15此网站)%，差异有统计学意义(P<0.05)；流式细胞仪检测发现大分割组MCF-7细胞的凋亡较小分割组更明显，48 h凋亡率达(19.07±2.38)%，而小分割组仅为(13.22±2.71)%，差异有统计学意义(P<0.05);qRT-PCR法检测发现，X线照射会引起MCF-7细胞内GATA6-AS1基因表达增强，大分割组GATA6-AS1基因表达增强更明显，达到对照组的(2.13±0.19)倍，差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot法检测发现，X线照射可下调GATA6-AS1基因邻近蛋白GATA6的表达，大分割组-GATA6蛋白下调更明显。结论 大分割法X线照射能够明显抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并促进细胞凋亡，增强乳腺癌MCF-7细胞GATA6-AS1基因表达，并下调其邻近基因表达产物GATA6的表达。