RAF信号通路

目的 探索免疫联合靶向治疗haematology (drugs and medicines)对原发性肝癌病人发生远期脑卒中的影响。方法 回顾性分析2016年1月至2018年Galunisertib化学结构12月西安交通大学第一附属医院肝胆外科134例原发性肝癌病人临床资料，采用单因素及多因素Cox回归筛选出影响原发性肝癌病人发生远期脑卒中的相关危险因素，采用倾向性评分匹配对独立危险因素和组间差MRTX849分子量异因素进行匹配，Kaplan-Meier法对相关危险因素的脑卒中发生率进行估计，绘制生存曲线并进行统计学检验。结果 多因素Cox回归分析发现年龄、免疫靶向联合治疗是肝癌病人发生远期脑卒的独立危险因素（P<0.05）,Kaplan-Meier预后分析显示在匹配前后免疫靶向联合治疗均是肝癌病人发生远期脑卒的重要风险因素，匹配前风险比为9.1、匹配后风险比为11.8（均P<0.05）。结论 免疫联合靶向治疗的肝癌病人发生远期脑卒中的风险增加。

本研究旨在探讨PLIN2在BCG（Bacillus Calmette-Guérin）感染的小鼠巨噬细胞RAW264.7中对自噬的调控作用。利用小干扰RNA敲减小鼠巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达，结合BCG感染，通过免疫印记、流式细胞术和免疫荧光等技术，检测胞内PLIN2、自噬、内质网应激及脂肪酸代谢相关因子指标的表达变化。结果显示：BCG感染显著上调巨噬细胞RAW264.7中PLIN2的表达（P＜0.05），极显著上调自噬相关蛋白ATG5（P＜0.01）、ATG12（P＜0.001）及LC3（P＜0.001）的表达并伴随着细胞内中性脂质的蓄积。敲减PLIN2能使BCG感染的巨噬细胞RNSC 119875AW264.7中自噬相关蛋白ATG5（P＜0.05）和ATG12（P＜0.05）显著下调以及LC3（P＜0.001）极显著下调，细Fluimucil Antibiotic IT胞自噬率极显著降低（P＜0.001）并极显著降低细胞内中性脂质的含量（P＜0.001）。同时，敲减PLIN2显著下调CHOP（P＜0.05）并极显著下调ATF4（P＜0.001）内质网应激相关蛋白表达，细胞内Ca~(2+)浓度极显著降低（P＜0.001）。此外，利用内质网应激激动剂Tunicamycin持续激活内质网应激通路后，无论是否敲减PLIN2，BCG感染的巨噬细胞内自噬相关蛋白表达均无显著差异（P＞0.05）。BCG感染巨噬细胞上调了PLIN2的表达，而PLIN2通过上调细胞内脂肪酸含量，进而级联激活PERK-eIF2α-ATF4-CHOP内质网Nirogacestat应激信号通路，诱导细胞自噬发生。

目的 通过观察苗药熏洗疗法对膝骨性关节炎（KOA）模型家兔软骨细胞中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的影响，探讨苗药熏洗疗法防治KOA软骨退变的作用机制。方法 40只家兔随机分为正常对照组、模型组、药洗组、熏蒸组、熏洗组，每组8只。除正常对照组外，其他4组家兔右膝关节腔内注射木瓜蛋白酶制造KOA模型，造模成功后，药洗组、熏蒸组与熏洗组家兔分别经苗药药洗、熏蒸及熏洗治疗20d。取家兔软骨组织培养软骨细胞，制备软骨细胞爬片，免疫组织化学染色法检测软骨细胞MMP-1、TIMP-1蛋白表达，实时荧光定量PCR检测软骨Institutes of Medicine细胞MMP-1、TIMP-1 mRNA的表达。结果 与正常组比较，模型组软骨细胞MMP-1、TIMP-1平均透光度、阳性细胞率以及m RNA表达差异有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较，各治疗组（药洗组、熏蒸组、熏洗组）家兔软骨细胞MMP-1平均透光度显著增高（P<0.05），阳性细胞百分率显著降低（P<0.Navitoclax体内实验剂量05）,MMP-1 mRNA表达显著降低；TIMP-1平均透光度显著降低（P<0.05），阳性细胞百分率显著增高（P<0.05）,TIMP-1 mRNA表达显著增高（P<0.05）；selleck熏洗组与药洗组、熏蒸组比较，上述指标差异有统计学意义（P<0.05）。结论 苗药熏洗可能通过下调MMP-1的蛋白和m RNA表达，以及上调TIMP-1蛋白和m RNA的表达，来延缓软骨细胞的损伤，达到防治KOA的目的。

癌症是一种以异常细胞无限selleck PLX3397增殖和扩散为特征的复杂疾病,一直以来是全球人类的主要死亡原因,对人类的生命健康造成了极大的危害。肿瘤标志物对于癌症早期诊断、监测和预后治疗具有重要参考价值,已成为预测多种肿瘤行为的可靠工具。因此,及时、准确的检测肿瘤标志物对于癌症的临床诊断、监测以及预后治疗非常重要。目前,临床上常用酶联免疫吸附法(ELISA)对肿瘤标志物进行定量分析,但该方法成本高、灵敏度低且需要专业技术知识,对各类肿瘤标志物的准确测定存在一定局限性。荧光免疫传感分析法是目前最有前景的免疫测定法之一,具有操作简单、响应速度快和稳定性高等优点。传统的荧光免疫传感器常用酶标记抗体作为识别单元、有机染料用作荧光探针,从而存在易受环境因素影响、灵敏度不高的问题。纳米材料具有独特光稳定性、催化性质和生物相容性等特性,为构建稳定、灵敏的荧光免疫传感器开辟了新的途径。本论文基于功能化纳米材料,结合目前已开发的荧光免疫传感器的不足和实际应用的需求,构建了系列简单、灵敏的荧光免疫传感器用于检测肿瘤标志物。主要研究内容如下:1、合成了DNA功能化金纳米颗粒(Au NPs)用于HCR信号放大的荧光免疫传感平台灵敏检测癌胚抗原(CEA)。在本研究中,将抗体固定到羧基功能化的磁珠上形成磁控免疫探针(MB-Ab),CEA适配体链与S_0引发链通过Au-S键修饰至Au NPs表面形成功能化Au NPs(Apt/Au NPs/S_0)。存在CEA时,Apt/Au NPs/S_0与MB-Ab特异性识别CEA抗原形成夹心免疫复合物,接着引入发夹链S_1与S_2,夹心免疫复合物中的S_0引发S_1、S_2链发生HCR反应,在Au NPs表面形成大量含G-四链体的长双链体DNA。随后加入亚甲基蓝溶液,亚甲基蓝通过π-π堆积相互作用嵌入至G-四链体中以及双链DNA骨架中,辅以磁性分离,导致溶液中亚甲基蓝明显减少,溶液中亚甲基蓝的荧光强度显著降低,通过检测溶液中的MB荧光强度来定量CEA。本工作构建的HCR信号放大型荧光免疫传感器可有效检测CEA,其线性检测范围为0.1～80ng m L~(-1),检测限为0.075 ng m L~(-1),主要归因于MB-Ab的分离富集能力、Au NPs表面负载能力以及HCR信号放大作用。此外,考察了荧光免疫传感器的选择性并成功将其用于人血清样品中CEA的测定,为早期临床诊断提供了一种有效途径。2、利用免疫磁珠、脂质体包埋金簇和链霉亲和素-生物素识别设计了一种多功能的脂质体三维网络结构,基于这种多功能网络结构建立了一种磁控荧光免疫传感器用于选择性、灵敏的检测CEA。加入CEA与MB-Ab及CEA适配体修饰的脂质体包埋金簇复合物(Biotin-Lip-Au NCs)形成夹心免疫复合物,再引入链霉亲和素和表面带生cancer biology物素的Biotin-Lip-Au NCs形成脂质体三维网络结构。利用曲拉通X-100破裂脂质体使脂质体三维网络中的Au NCs释放,辅以磁性分离得到大量释放的Au NCs,将大量Au NCs的荧光作为信号输出。设计的磁控免疫传感器具有良好的选择性和灵敏度,可有效检测CEA,其线性检测范围为0.05～40 ng m L~(-1),检测下限为13.2 pg m L~(-1)。该免疫传感器能够灵敏的检测血清样品中的CEA,为简化现场分析设备开发中的实验过程提供有效Microbiology抑制剂途径。3、合成了聚多巴胺功能化的过氧化铜/沸石咪唑骨架(CP/ZIF-8/PDA)纳米颗粒自供H_2O_2用于荧光免疫吸附法(FLISA)测定CEA。本研究中将CEA适配体修饰到CP/ZIF-8/PDA表面形成信号探针。存在CEA时,信号探针可通过夹心免疫反应固定到96孔板上,在酸性条件下腐蚀PDA和ZIF-8释放CP,CP在酸性条件下同时生成Cu~(2+)和H_2O_2,接着Cu~(2+)和H_2O_2进行类芬顿反应生成羟基自由基(·OH),·OH通过自身的强氧化性将邻苯二胺(OPD)氧化为2,3-二氨基吩嗪(DPA),DPA的荧光可作为有效的信号输出。本工作利用酸触发级联反应,Cu~(2+)和H_2O_2同时同地产生,在溶液某处富集成高浓度,从而进行高效的类芬顿反应,生成大量·OH,促进OPD氧化。通过两轮高效反应,可有效放大荧光信号,提高荧光免疫传感器的灵敏度。该法操作简单,无需酶参与催化,无需外加金属离子或H_2O_2即可发生高效的类芬顿反应,实现了CEA的灵敏检测,其线性检测范围为0.01～20 ng m L~(-1),检测下限为7.6 pg m L~(-1)。

目的 探讨乳腺癌转移前肺组织的变化及其转移的可能机制。方法 将Enasidenib分子量20只雌性BALB/c小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。实验组小鼠腹壁上第4对乳腺处注射乳腺癌细胞悬液，对照组小鼠在相同部位注射等量磷酸盐缓冲液(PBS)。在注射后第0、7、14、21和28天，每组分别取2只小鼠处死，将肺组织用4%多聚甲醛固定，石蜡Lapatinib细胞培养包埋切片。采用HE染色法观察小鼠肺组织形态学变化，免疫组织化学染色法检测肺组织中纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原和CD31的表达水平；应用Image-Pro Plus 6.0软件进行纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原和CD31表达的半定量分析。结果 与对照组比较，实验组小鼠肿瘤体积不断增长，体质量呈下降趋势；HE染色结果显示，肺组织炎性细胞增多，正常生理结构被破坏；免疫组织化学染色结果显示，对照组与实验组纤维连接蛋白、Ⅰ型胶原和CD31的表达量总Recurrent urinary tract infection体差异均有统计学意义(P均<0.001)。结论 在转移前期，乳腺恶性肿瘤能够调节肺组织微环境，诱导肺组织发生炎症性改变，促进转移性肿瘤的发生。

目的：探究炎症标志物对晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者抗PD-1治疗疗效及安全性的预测价值。方法：动态监测2018年1月至2020年12月在海军军医大学第一附属医院接受抗PD-1治疗的222例晚期NSCLC患者的血清炎症标志物，应medical malpractice用ROC曲线计算最佳截断值并将炎症指标分为高和低水平两组。以Log-Rank检验和Kaplan-Meier法分析患者临床病理特征及各炎症标志物水平与患者预后的关系，单因素和多因素Cox回归分析估算PFS和OS的风险比。Fisher精确检验分析各炎症标志物基线水ICI 46474平高和低两组与免疫相关不良反应（irAE）的相关性，Wilcoxon秩和检验比较治疗前（基线）与首次PR、PD时及发生irAE时各炎症标志物水平的差异。结果：血清炎症标志物NLR、MLR、PLR、LDH、CRP和IL-6基线水平升高与患者的PFS和OS显著缩短有关（圴P<0.01）。多因素分析结果显示，基线升高的PLR、MLR和LDH是PFS和OS的独立危险因素（P<0.05或P<0.01）。NLR、LDH、CRP和IL-6水平在患者首次获得PR时显著降低（P<0.05或P<0.01）,LDH、CRP、IL-6和TNF-α水平在出现PD时显著升高（P<0.05或P<0.01）。发生irAE时，LDH、CRP、IL-6、IL-10和TNF-α水平与基线水平相比显著升高（P<0.05或P<0.01）。结论：晚期NS此网站CLC抗PD-1治疗中炎症标志物水平的下降提示患者病情改善，其水平的上升则提示病情进展且与irAE的发生相关，动态监测炎症标志物可以预测抗PD-1治疗的疗效及安全性，有助于筛选抗PD-1治疗的最佳晚期NSCLC人群。

目的 探讨骨肉瘤干细胞差异表达microRNA(miRNA)及其对骨肉瘤干细胞的干性特性（自我更新、侵袭、凋亡）的影响。方法 采用无血清悬浮培养法和流式分选术分离鉴定骨肉瘤干细胞；分别采用成球实验、体外侵袭鉴定骨肉瘤干细胞的干性特性；高通量测序检测骨肉瘤干细胞中差异表达miRNA；采用定量逆转录PCR(qRT-PCR)技术检测相关差异表达miRNA的情况，验证miRNA结果；相关miRNA抑制剂干扰后，分别进行成球实验和侵袭实验检测miRNA对骨肉瘤干细胞自我更新、侵袭能力和细胞凋亡的影响。结果 成功分离Saos-2的CD133~+和CD133~-细胞，具有较强的自我更获悉更多新能力和侵袭能力。与CD133~-细胞相比，CD133~+细胞的高表达miRNAs共有15个；低表达miRNAs共有2个。采用qPCR技术验证高通量测序差异表达miRNA相关结果，CD133~+亚oncolytic Herpes Simplex Virus (oHSV)群中miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091表达上调，miR-3143、miR-3150a-5p表达下调。抑制相关高表达miRNA(miR-33b-3p、miR-3648、miR-4442、miR-5091)表达后，CD133~+细胞的自我更新能力和侵袭均下降，细胞凋亡上升。结论 骨肉瘤干细胞中具有多种差异表达miNSC 125973抑制剂RNA，其对骨肉瘤干细胞的干性特性具有调控作用。

目的 评价冠状动脉造影血流储备分数(caFFR)与导丝血流储备分数(FFR)对不同性别冠心病患者缺血诊断价值的影响。方法 回顾性分析2021年11月至2022年2月在阜外华中心血管病医院行冠脉造影，发现至少有1支主要冠状动脉直径狭窄50%～90%(造影视觉评估),且同时行经导丝FFR检查和caFFR检查的64例Compound C使用方法冠心病患者(血管数64支)。分析caFFR在女性组(n=34)与男性组(n=30)患者中与FFR的相关性、一致性，以FFR≤0.8作为心肌缺血金标准，比较caFFR在两组间的诊断价值。结果 女性组FFR与caFFR的相关性良好(r=0.951,P<0.01);男性组FFR与caFFR的相关性良好(r=0.964,P<0.01)caFFR在女性组和男性组的诊断准确性95.1%比96.4%、敏感性87.5%比85.selleck产品7%、特异性88.9%比85.7%、阳性预测值87.5%比88.9%、阴性预测值88.9%比85.7%,差异均无统计学意义(P>0.01)。cBioactive coatingaFFR诊断受试者工作特征曲线下面积(AUC)女性组为0.951(95%CI:0.818～0.996),男性组为0.964(95%CI:0.824～0.999)。两组相比差异无统计学意义(Z=0.293,95%CI:-0.0733～0.0991,P>0.01)。结论 冠状动脉造影caFFR与导丝FFR对冠心病患者均具有良好的相关性、一致性，性别对caFFR值没有影响。

生物标志物是人们发现的一类能够客观表征生命体健康程度的物质,实现其精准检测对于疾病诊断和预防具有非常重要的意义。电化学发光(ECL)生物传感器是一种以生物标志物作为目标物,利用生物敏感材料作为识别元件,基于材料的ECL响应原理,用于分析目标物的高灵敏传感分析方法。相较于临床诊断领域基于大型仪器的相关分析方法,基于ECL生物传感器的生物标志物分析方法具有操作方便、成本低廉、样品消耗量少、分析速度快等显著优势,因而在生物标志物检测领域具有十分重要的应用前景。在本论文中,我们利用三种常见的生物识别元件(多肽、抗原-抗体、核酸适配体)和金属配合物ECL发光体Ru(bpy)_2(mcpbpy)Cl_2,结合丝网印刷电极(SPE),构建了三种基于不同识别机理的ECL生物传感芯片,研究了其在生物标志物(半胱天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、癌胚抗原(CEA)和凝血酶(TB))检测中的应用。具体研究内容如下:1、半胱天冬氨酸蛋白酶(caspases)是一类与细胞凋亡密切相关的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶。监测caspase-3的活性,对于了解其在细胞凋亡过程中的作用,以及相关疾病的诊断与治疗具有重要意义。我们开发了一种新型三元E7080自增强ECL材料(Ru-PEI@PCN-333(Al)),基于多肽剪切介导原理,构建了检测caspase-3活性的一次性ECL传感芯片。该发光材料采用MOF(PCN-333(Al))固载发光试剂Ru(bpy)_2(mcpbpy)Cl_2,利用共价键将共反应剂聚乙烯亚胺(PEI)与发光试剂连接,促进了材料的自增强ECL发光效率。将具有caspase-3特异性剪切位点Asp-Glu-Val-Asp(DEVD)、并能够猝灭Ru~(2+)ECL信号的二茂铁(Fc)修饰多肽利用Au-S键组装到SPE电极表面,构建了一次性ECL传感芯片。当存在caspase-3时,由于肽段被特异性切割,使含Fc肽段脱离电极表面,实现了ECL信号的“Turn-ON”响应。其检出限低至0.017 pgselleckchem Imidazole ketone erastin/m L,具有出色的选择性、重现性和稳定性。成功的用于检测两种抗癌药物柔红霉素和阿霉素诱导的MOLM-13细胞凋亡。2、癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)是由人体肿瘤细胞产生的糖蛋白,是一种在临床诊断和治疗癌症中常用的疾病标志物。通常在癌症患者的血清中,CEA水平明显升高。监测血清中CEA的浓度,对于疾病的早期诊断和了解癌症进程具有重要意义。我们开发了一种新型四元自增强ECL材料(Au NPs-Ru-Arg@NH_2-Ti_3C_2-MXene),基于抗原-抗体免疫识别原理,构建了检测CEA浓度的一次性ECL传感芯片。该材料以氨基修饰的过渡金属碳化物二维纳米层状材料(NH_2-Ti_3C_2-MXene)作为载体,利用共价键将发光试剂Ru(bpy)_2(mcpbpy)Cl_2与共反应剂L-精氨酸(L-Arg)连接,再利用静电作用引入Au NPs,制备了四元自增强ECL材料。将CEA抗体(anti-CEA)滴到SPE电极表面,构建了一次性ECL传感芯片。当存在CEA时,由于蛋白质分Dendritic pathology子的绝缘作用和抗原-抗体生物偶联引起的空间位阻,实现了ECL信号的“Turn-OFF”响应。其检出限低至1.5 pg/m L,具有出色的稳定性、重现性和选择性,可成功的用于检测健康人和癌症患者血清样本中CEA的浓度。3、凝血酶(Thrombin,TB)是一种多功能的丝氨酸蛋白酶,在调节止血等多种生理过程中发挥着重要作用。其浓度异常往往涉及诸如心血管疾病、炎症反应、血栓栓塞等多种疾病。因此,研究一种高效的TB检测方法对于疾病的早期诊断和预防具有重要实用价值。我们以SPE为工作电极,TB适配体为识别元件,制备了一种简单的用于检测血清中TB的一次性ECL传感器芯片。首先,通过循环伏安(CV)法在SPE电极表面电聚合一层聚半胱氨酸(p L-Cys),利用Au-S键组装一层Au NPs,并将含有巯基的发夹DNA固定在SPE电极表面,构成了一次性ECL传感芯片。将ECL发光试剂Ru(bpy)_2(mcpbpy)Cl_2通过共价键与ss DNA结合,制成发光探针ss DNA-Ru。该探针与TB适配体的一部分碱基序列互补形成捕获探针。当存在TB时,捕获探针中适配体与TB结合,导致捕获探针发生解离,游离出ss DNA-Ru。将该溶液滴加到传感芯片后,发夹DNA与游离的ss DNA-Ru碱基配对形成双链。发光试剂被组装到了电极表面,p L-Cys作为共反应剂,实现了ECL信号的“Turn-ON”响应。其检出限低至0.2 f M,具有出色的稳定性、重现性和选择性,成功用于检测人血清样本中的TB浓度。

Notch信号通路是一种进化保守的信号通路,在调节胚胎发育、细胞分化和组织内环境稳态等许多方面发挥重要作用。该通路的失调与癌症发生发展密切相关。然而,Notch信号通路特定于分子环境的致癌/抑癌作用尚未明确,给Notch靶向治疗研究带来了巨大挑战。先前对Notch信号通路的研究主要集中在其在少量肿瘤环境中单个成分的作用上,难以描述其全面分子特征。随着高通量技术的快速发展和从中产生的多组学数据,为全面展开对Notch信号通路的分子驱动机制的研究创造了一个前所未有的机会。为了全面了解Notch信号通路在泛癌中的潜在分子特征,本研究综合多组学数据及临床数据,以探究Notch信号通路在癌症中的潜在贡献和应用潜力。首先,我们通过数据库搜集和文献挖掘筛选出22个Notch核心基因。其次,基于The Cancer Genome Atlas(TCGA)数据库中33种癌症的9,125个肿瘤样本的高通量测序数据,综合基因突变、拷贝数变异、m RNA表达、甲基化、及非编码RNA五个分子水平从信息学分析及功能扰动方法对Notch核心基因进行分子表征。最后,利用降噪自编码器筛选与患者生存相关的多组学预后特征,建立COX回归模型评估Notch通路多组学特征的预后能力。此外,本研究还探究了与Notch信号相关的生物学途径、浸润免疫细胞组成和药物敏感性等。研究结果显示,Notch基因在DNA变异水平上相对稳定,其中NOTCChlamydia infectionH1是突变频率最高的基因,在宫颈鳞/腺癌、食管癌、头颈鳞状细胞癌和肺鳞癌中被鉴定出可能是驱动癌症发生的显著突变基因。Notch基因具有癌症特异性的表达模式,其中DLL3在16种癌症中显著上调,靶向DLL3治疗某些肿瘤已成为当下研发的热点。聚类分析鉴别出6个集群,聚类结果具有显著预后性。其中Notch通路相较于其他9条信号通路在某些女性癌症(乳腺癌、宫颈鳞/腺癌、子宫肉瘤)中具有独特的表达异质性,可将其与其他癌症类型进行区分。在调控水平上,Notch通路基因可由多种nc RNPF-07321332分子量A调节,主要包括mi RNA/isomi R、lnc RNA和circ RNA等。如lnc RNA PVT1可通过竞争结合mi R-30a-5p从而扰动JAG2在肺鳞癌中的表达,而mi RNA位点产生的多重isomi R进Dinaciclib一步复杂了编码-非编码RNA调控网络。此外,研究发现Notch基因单核苷酸变异(SNV)水平与免疫细胞浸润在不同癌症中具有正/负调节相关性。药物敏感性分析显示DLL3与多种药物密切相关,表明DLL3靶向药物研发具有较好的应用前景。最后,通过整合多组学特征证明Notch基因可以用来评估患者风险,具有一定的预后能力,暗示其在癌症发生发展和预后中的潜在贡献。综上,我们通过对Notch通路多组学数据的整合分析,发现了其具有频繁的基因扩增、高表达异质性和显著的预后相关性,所有这些发现都有助于探索该通路在癌症病理生理学中的关键作用,并拓宽对不同RNA与Notch通路cross-talk的理解,助力Notch通路在精确医学中的潜在应用。