RAF信号通路

目的：探究海马N-乙基马来酰亚胺敏感因子(N-ethylmaleimide sensitive factor,Medical kits NSF)在慢性功能性内脏痛大鼠中枢敏化中的作用及机制。方法 :（1）建立肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)模型大鼠：新生SD乳鼠出生第3天至第21天，每日固定时间给予3小时的母婴分离。对照组乳鼠不做任何处理，正常饲养。待大鼠生长至8周，检测大鼠腹外斜肌对40 mmHg和60 mmHg结直肠扩张引起的放电反应，评估大鼠的内脏痛觉敏感性；（2）免疫印迹法检测大鼠海马NSF的表达；（3）大鼠行海马脑立体定位置管，双侧海马CA1微量注射不同剂量NSF的特异性抑制剂pep2m，比较给药前后腹外斜肌放电反应的差异；（4）用含有pep2m的人工脑脊液灌流脑片60 min，取海马组织，免疫印迹法检测α-氨基-3-羟基-5-甲基异恶唑-4-丙酸(alpha-amino-3-hydroxy-5-methylisoxazole-4-propionicPLX4032使用方法 acid, AMPA)受体亚型谷氨酸受体2 (glutamate receptor2, GluR2)的表达。结果：与正常大鼠相比，IBS模型大鼠海马NSF表达显著增高；海马双侧微量注射pep2m可剂https://www.selleck.cn/products/Puromycin-2HCl.html量依赖性抑制IBS模型大鼠内脏痛觉敏感性；用含有pep2m的人工脑脊液灌流脑片后，IBS模型大鼠海马Glu R2表达显著降低。结论：海马NSF可通过增强AMPARs-Glu R2的功能，诱导慢性功能性内脏超敏反应。

为了获得可溶性表达的牛冠状病毒病毒样颗粒疫苗，并对其进行免疫效果评价。本研究将五种分子伴侣pTf16、pG-Tf2、pG-KJE8、pGro7和pKJE7分别转入E.coli BL21（DE3）中制备伴侣感受态细胞，将携带乙肝病毒核心抗原的重组质粒pET-32a(+)-HBcAg-BCoV S1+S2转化至SBE-β-CD使用方法制备好的五种分pathology competencies子伴侣感受态细胞中，各种共表达菌株通过双抗板筛选、诱导剂诱导表达后，通过SDS-PAGE检测上清是否表达来筛选有效的伴侣质粒。从诱导时间和诱导剂浓度选择最佳表达条件。纯化共表达的重组蛋白，利用透射电镜观察是否形成病毒样颗粒（VLPs）。用制备好的VLPs乳化成疫苗免疫小鼠，采用ELISA方法检测免疫后小鼠血清中的IgG特异性抗体及细胞因子IFN-γ、TNF-α和IL-4的水平。结果显示成功制备上清表达的BCoV VLPs，将VLPs乳化成疫苗后免疫小鼠，小鼠产生的BCoV IgG抗体水平和细胞因子水平均显著高于对照组（P<0.05）。结果表明分子伴侣pG-KJE8可以在16℃更好的促进牛冠状病毒病毒样颗粒的可溶性表达，且与分子伴侣共表达的BCoV VLPs具有免疫活性，对制备廉价高效的牛冠状病毒Taurine采购样颗粒疫苗具有重要意义。

目的：探讨葛根芩连汤加味联合阿托伐他汀对老年冠心病合并高脂血症病人血脂水平的影响。方法：借助前瞻性Rapamycin临床试验数字双盲法将2020年1月至2020年12月期间在本院接受治疗的100例老年冠心病合并高脂血症病人分为两组，两组均接受西医药物治疗，对照组另使用阿托伐他丁治疗，研究组加用葛根芩连汤加味治疗，Integrative Aspects of Cell Biology患者对比临床疗效、血脂水平、用药安全性。结果：研究组临床疗效高于对照组（P<0.05），治疗前患者血脂指标水平差异不明显（P>0.05），治疗后4周研究组TC水平、TG水平、LDL-C水平降低高于对照组（P<0.05）,HDL-C水平高于对照组（P<0.05），心血管不良事件率低于对照组（P<0.05）。结论：老年冠心病合并高脂血症病人使用葛根芩连汤加味联合阿托STM2457说明书伐他汀治疗，临床疗效理想，用药安全性较高，可有效改善血脂水平，该联合用药方式在临床上具有应用价值。

目的:探讨芪苈养心汤治疗冠心病合并慢性心力衰竭(CHF)的临床疗效。方法:选取86例冠心病CHF患者为本研究的观察对象，均符合气虚血瘀证。遵循随机数字表法的原则进行两组，观察组与对照组中各有43例患者。应用西医治疗方法的患者为对照组，联合应用西医治疗方法及芪苈养心汤治疗的患者为观察组。所有患者治疗30天后，评价临床疗效；比较治疗前及治疗后的心功能指标及血清学指标水selleck Gefitinib平。结果:观察组与对照组患者的临床总有效率分别为95.35%(41/43)、72.09%(31/43),观察购买AZD9291组高于对照组(P<0.05)。治疗后两组LVEF升upper genital infections高，LVESD、LVEDD降低(P<0.05),与对照组治疗后比较，观察组LVEF治疗后升高，LVESD、LVEDD治疗后降低(P<0.05)。治疗后两组血清hs-CRP、NT-proBNP水平降低(P<0.05),与对照组治疗后比较，观察组血清学指标治疗后降低(P<0.05)。结论:芪苈养心汤可以改善冠心病CHF患者心功能，调节血清hs-CRP、NT-proBNP水平，取得的治疗效果确切，值得临床进一步推广。

目的：探讨患者直接抗球蛋白试验（direct antiglobulin test,DAT）阳性强度的关键影响因素，对临床DAT阳性患者在抗生素用药或红细胞输血时提供指导。方法：回顾性分析首都医科大学附属北京世纪坛医院2015年1月至2020年12月27 382例次行DAT检测的患者资料，对患者性别、年龄、临床诊断、抗生素使用、红细胞输注、DAT阳性强度等进行统计分析。结果：共有27 382人次患者进行了DAT检测，DAT阳性患者5 745人次（20.98%）。将不同DAT强度患者按男、女分组后做MannWhitney U检验，结果显示，男性DAT+强度高于女性，组间差异有统计学意义（U=2 764 704.5,P<0.001）。将DAT阳性患者按年龄分为3组（<18岁组、18～60岁组和>60岁组）后做KruskaTriterpenoids biosynthesisl-WalSB431542作用lis检验。结果显示，不同年龄组间DAT阳性强度差异有统计学意义（H=200.4,P<0.001）,<18岁组和>60岁组DAT阳性强度高于18～60岁组。不同临床诊断之间分析结果显示DAT阳性强度差异有统Tofacitinib浓度计学意义（H=70.82,P<0.001）。Mann-Whitney U检验结果显示，使用抗生素和未使用抗生素组患者的DAT阳性强度分布不同，使用抗生素组患者DAT阳性强度更高（U=1 853 921.5,P<0.001）。红细胞输注组患者DAT阳性强度更高（U=3 315 953.5,P<0.001），但多次红细胞输注并未引起DAT阳性强度变化（U=108 911.5,P=0.68）。结论：在DAT阳性患者中，患者的性别、年龄、临床诊断、抗生素的应用、红细胞输注等均影响其DAT阳性强度，多次红细胞输注未见引起DAT+强度变化，临床上对DAT阳性强度较高的患者应谨慎使用抗生素及进行红细胞输注。

目的：分析卤代苯醌（HBQs）对人肝癌HepG2细胞的半数抑制浓度（IC_(50)）与结构参数间的定量构效关系，探讨可能影响HBQs细胞毒性的结构参数。方法：体外培养HepG2细胞，采用不同浓度HBQs溶液作用CX-5461 IC50细胞，同时设空白对照组[10%胎牛血清（FBS）+DMEM培养基]和阴性对照组（10%FBS+DMEM培养基+1.33%MeOH）。MTS法和中性红摄取试验（NRU）法确定HBQs的作用浓度，采用MTS法和NRU法检测各组细胞存活率并计算HBQs对人肝癌HepG2细胞的IC_(50)。采用量子化学计算模块MOPAC计算每种HBQs的结构参数。采用单因素线性回归分析方法，根据HBQs的IC_(50)和HBQs结构参数构建定量结构-毒性关系（QSTintestinal microbiologyR）模型。结果：MTS法检测2,6-DCBQ的作用浓度为75、100、125、150、175、200、225和250μmol·L~(-1),DCMBQ的作用浓度为175、200、225、250、275、300和325μmol·L~(-1),TCBQ的作用浓度为200、225、250、275、300和325μmol·L~(-1);2,5-DBBQ的作用浓度为75、100、125、150、175和200μmol·L~(-1),2,6-DBBQ的作用浓度为200、 225、 250、 275、 300和325μmol·L~(-1); NRU法检测，2,6-DCBQ的作用浓度为25、50、 75、 100和125μmol·L~(-1), DCMBQ的作用浓度为125、 150、 175、 200、 225和250μmol·L~(-1),TCBQ的作用浓度为175、200、225、250、275和300μmol·L~(-1),2,5-DBBQ的作用浓度为75、100、125、150和175μmol·L~(-1),2,6-DBBQ的作用浓度为125、150、175、200、225和250μmol·L~(-1)。各组HepG2细胞存活率随HBQs浓度的升高明显降低，呈现明显剂量-反应关系。MTS法检测HBQs对HepG2细胞毒性作用为2,6-DCBQ>2,5-DBBQ>DCMBQ>TCBQ>2,6-DBBQ;NRU法检测HBQ对HepG2细胞毒性作用为2,6-DCBQ>2,5-DBBQ>CL13900DCMBQ>2,6-DBBQ>TCBQ。单因素多元线性回归分析，MTS法和NRU法检测HBQs的IC_(50)与HBQs结构参数间相关性分析差异均无统计学意义（P>0.05）。结论：卤代原子的取代位置、种类、数量可影响HBQs的毒性作用，且呈现卤素取代个数越多其毒性越小的趋势。

目的 探讨专项干预对乳腺癌根治术老年患者术后凝血功能与上肢淋巴水肿的影响。方法 将102例乳腺癌老年患者根据干预方式的不同分为常规组与专项组，每组5Healthcare-associated infection1例。常规组采用常规干预，专项组采用专项干预。比较两组患者干预前后的凝血功能指标[凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）、凝血酶时间（TT）、D-二聚体（D-D）]，血清炎性因子水平[C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]，统计两组患者术后下肢深静脉血栓形成（DVT）、上肢淋巴水肿发生率。结果 干预后，两组患者PT、APTT、TT均明显延长，FIB、D-D水平均明显降低，专项组PT、APTT、TT均明显长于常规组，FIB、D-D水平均明显低于常规组，差异均有统计学意义（P﹤0.01）。干预后，两组患者CRP、IL-6、TNF-α水平均明显降低，且购买GSKJ4专项组均明显低于常规组，差异均有统计学意义（P﹤0.0RP56976 MW1）。专项组术后上肢淋巴水肿、DVT发生率均低于常规组，差异均有统计学意义（P﹤0.05）。结论 专项干预可改善患者术后的凝血功能指标及血清炎性因子水平，降低乳腺癌根治术老年患者术后下肢DVT、上肢淋巴水肿发生率。

目的 观察子午流注腹部按摩联合穴位贴敷对气虚型冠心病便秘患者的干预效果。方法 随机抽取68例气虚型冠心病便秘患者行非同期随机对照试验，共分4组，A组17例，B组18例，C组17例，D组16例。A组行常规护理; https://www.selleck.cn/products/ms-275.htmlB组在常规护理的基础上行子午流注腹部按摩; C组在常规护理的基础上行穴位贴敷; D组行子午流注腹部按摩的同时行穴位贴敷。观察4组干预前及干预1周、2周后的中医证候评分、便秘生活质量量表(PACselleckchem GSK126-QOL)评分、疗效评定。结果 4组不同时间中医证候评分、便秘生活质量及评分疗效评价比较，时间效应，组间效应差异均有统计学意义(P <0.05)，其中D组效果最优，A效果最差。结论 子午流注腹部按摩和穴位贴敷，不论是单独还是联合使用均genetic sweep能有效改善气虚型冠心病患者的便秘症状，其中联合护理效果最佳。

2型糖尿病(T2DM)患病人数逐年上升,并且患者往往伴随肥胖。高血糖和肥胖共同引起许多心血管和代谢类疾病。开发同时具有降糖和减重活性的药物已成为热点。内源性多肽胰高血糖素样肽-1(GLP-1)与其受体(GLP-1R)结合后促进胰岛素分泌发挥降糖活性,同时还具有保护心血管、减缓胃排空速度、增加饱腹感等作用,在降糖和减重药物开发中极具潜力。目前,基于GLP-1的药物开发主要有两个方向:一是发展长效化策略,提高其体内稳定性,二是开发能同时激活GLP-1R及其他受体的多重受体激动剂。课题组此前将GLP-1和胰高血糖素的序列杂合,发现了具有GLP-1R和胰高血糖素受体(GCGR)双重激动活性的多Alisertib肽x GLP/GCG-13,在细胞和动物实验中展现出良好的降糖和减重活性。然而,x GLP/GCG-13的体内半衰期较短(t_(1/2)=0.4 Pexidartinib浓度h),限制了其进一步临床开发。基于上述背景和研究基础,本课题以x GLP/GCG-13为先导化合物,对其进行进一步结构改造和生物评价,以期提高其稳定性和生物活性,具体研究内容如下:(1)将x GLP/GCG-13的Ser_2用非天然氨基酸D-Ser替换,以提高对二肽基肽酶-4(DPP-Ⅳ)的耐受性。鉴于糖基修饰可提高多肽的稳定性,将x GLP/GCG-13的Ser_(11)到Trp_(25)依次用糖基(半乳糖、N-乙酰葡萄糖胺)修饰的丝氨酸或苏氨酸替换,共合成30个新型糖肽。(2)通过细胞实验Prosthetic knee infection测定了糖肽1a-o及2a-o对GLP-1R和GCGR的激动活性,分析其构效关系,筛选出双重受体激动活性最强的糖肽化合物1f(GLP-1R EC_(50)=0.061±0.024 n M,GCGR EC_(50)=0.21±0.08 n M)。(3)药代动力学实验显示,与x GLP/GCG-13相比,1f在大鼠体内的半衰期显著提高(t_(1/2)=3.1 h),与上市药物liraglutide相当,证明了糖基修饰对多肽长效化的作用。(4)小鼠实验证明,1f具有优异的急性降糖活性和摄食抑制能力。糖尿病db/db小鼠经四周的1f治疗后,糖耐受和胰岛素分泌能力显著提升,效果优于liraglutide治疗组。肥胖DIO小鼠经三周的1f治疗后,体重减轻26.3%,脂肪含量减少36.0%,甘油三酯和总胆固醇指标显著改善,效果优于liraglutide和cotadutide。综上所述,本课题发现了具有GLP-1R和GCGR双重受体激动活性的新型糖肽1f,在动物实验中显示出优异的降糖和减重活性。糖基修饰显著延长了1f的体内半衰期,证明了糖基修饰是多肽药物长效化的有效策略。

目的 探讨Toll样受体4(Toll like receptor 4,TLR4)/核转录因子κB(nuclear factAdavosertib采购or-κB,NF-κB)通路在二氧化硅（SiO_2）所致大鼠矽肺模型肺泡巨噬细胞的脂质代谢中的作用。方法 按随机数字表法将36只SD大鼠分为正常组、模型组、抑制剂组。模型组、抑制剂组采用一次性气管内缓慢滴注1mL SiO_2悬浮液进行造模。造模成功后抑制剂组大鼠每天定时耳缘静脉BH4 tetrahydrobiopterin注射TAK-242(TLR4/NF-κB信号特异性抑制剂)，剂量为0.5 mg/kg，正常组和模型组注射等剂量生理盐水。4周后处死大鼠收集支气管灌洗液（bronchial lavage fluid,BALF）,ELISA测定各组大鼠BALF中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量；提取BALF中的肺泡巨噬细胞进行培养，油红O染色观察各组大鼠肺泡巨噬细胞的脂滴形成；Western blot检测各组肺泡巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平。结果 与正常组相比，模型组、抑制剂组大鼠BALF中IL-6和TNF-α的含量，巨噬细胞中油红O阳性比例，巨噬细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的表达升高，差异具有统计学AMG510分子式意义（均P<0.05）；与模型组相比，抑制剂组大鼠上述指标降低，差异具有统计学意义（均P<0.05）。结论 在SiO_2所致大鼠矽肺模型中，TLR4/NF-κB信号参与肺泡巨噬细胞的脂质代谢的调控，抑制该信号的表达，能明显抑制矽肺的病理损伤。