RAF信号通路

背景：研究表明，过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1β(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator 1beta,PGC-1β)通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌细胞的增殖、迁移及凋亡。而PGC-1β能否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞的干性及其影响机制还不清楚。目的：探究PGC-1β对乳腺癌干细胞干性selleck的影响及调控机制。方法：将PGC-1β空载体、过表达载体(Lv-PGC-1β)、干扰载体(Sh-PGC-1β)分别转染乳腺肿瘤MCF-7细胞，荧光显微镜观察转染效果；qRTPCR及Westernblot验证慢病毒转染后PGC-1β mRNA和蛋白的相对表达。在干性培养基中分别培养未转染组、PGC-1β空载体组、PGC-1β过表达组及PGC-1β干扰组的MCF-7细胞使其成为乳腺癌干细胞，显微镜下观察并记录干细胞球体的形成过程，Western blot验证干性标志物(ABCG2、ALDH1、OCT4)、上皮-间充质转化标记物(E-Cadherin、N-Cadherin、VimentKPT-330研究购买in、Slug和ZEB1)及PI3K/AKT/mTOR通路核心蛋白的相对表达。结果与结论：(1)MCF-7贴壁细胞经干性培养基培养形成了折光性好、中间密度高的致密球干细胞；(2)乳腺癌干细胞干性蛋白的表达明显高于其贴壁细胞(P <0.01)；(3)与未转染组、空载体组相比，PGC-1β过表达组乳腺癌干细胞的形成时间缩短，细胞球体数目增多、球体直径增大(P <0.01)，而PGC-1β干扰组细胞球体数目减少、球体直径减小(P <0.01)；(4)PGC-1β过表达组干性相关蛋白的表达高于未转染组、空载体组(P <0.01)，上皮-间充质转化相关蛋白E-Cadherin表达低于未转染组、空载体组(P <0.01)，而N-Cadherin、Vimentin、Slug和ZEB1的表达高于未转染组、空载体组(P <0.01);PI3K/AKT/mTOR相关蛋白及其磷酸化相关蛋白表达高于未转染组、空载体组(P <0.01),PGC-1β干扰组结果则与PGC-1β过表达组Fine needle aspiration biopsy相反；(5)结果提示，PGC-1β能够通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路影响乳腺癌干细胞上皮-间充质转化，从而促进乳腺癌干细胞的形成及干性相关标志物的表达。

目的 比较保乳术后放疗及全乳切除后放疗对T1～2 N1M0三阴性乳腺癌(TNBC)预后的影响。方法 选取2017年4月至2020年4月在河南省镇平县人民医院接受手术治疗的T1～2 N1M0 TNBC患者90例，按照患者及家属意愿分为保乳组(接受保乳术治疗，45例)和全切组(采取全乳切除术治疗Osteoarticular infection，45例)，术后均接受放疗辅助治疗，比较两组临床效果、肿瘤标志物水平、生命质量及近远期复发情况、2点击此处年生存率。结果 放疗后，两组血清糖类抗原(CA125、CA153、CA199)、癌胚抗原(CEA)水平均较术前显著改善，差异有统计学意义(P <0.05)；放疗后，两组血清CA125、CA153、CEA、CA199水平比较，差异无统计学意义(P> 0.05)。放疗后，保乳组患者FACT-B各维度评分均优于全切组，差异有统计学意义(P <0.05)。两组近远期复发率及2年生存率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论 T1～2 N1M0 TNBC患者采用保乳术后放疗及全乳切除后放疗的近远期复发率及S63845化学结构2年生存率无显著差异，均能有效改善血清肿瘤标志物水平，但相较全乳切除，使用保乳术的患者生命质量水平更高。

<正>1病例简介男，32岁，主诉：小便不能自解、双下肢无力10 d。既往有复发性关节炎病史。查体：双上肢肌力4+级，双上肢肌张力正常，双下肢肌力0级，双下肢肌张力低，双上肢腱反射（+），双下肢腱反射selleck合成（-），双侧巴宾斯基征未引出。胸6平面以下痛觉消失，位置觉、振动觉减退。MRI头颅+颈胸腰椎平扫及增强（图1A～F）示：age of infection颅脑、延髓、全脊髓异常信号：获悉更多视神经脊髓炎谱系病？髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin-oligodendrocyte glycoprotein,MOG）抗体相关脊髓炎？中枢神经系统脱髓鞘疾病抗体：抗MOG抗体IgG强阳性（滴度1∶100）,AQP4抗体阴性。肌电图：双下肢体感诱发电位异常。诊断为抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白免疫球蛋白G抗体相关疾病（anti-myelin oligodendrocyte glycoprotein-IgG associated disorders,MOGAD）。患者经大剂量激素冲击及丙种球蛋白治疗后症状改善，病情稳定后出院。

<正>1病例简介男，32岁，主诉：小便不能自解、双下肢无力10 d。既往有复发性关节炎病史。查体：双上肢肌力4+级，双上肢肌张力正常，双下肢肌力0级，双下肢肌张力低，双上肢腱反射（+），双下肢腱反射selleck合成（-），双侧巴宾斯基征未引出。胸6平面以下痛觉消失，位置觉、振动觉减退。MRI头颅+颈胸腰椎平扫及增强（图1A～F）示：age of infection颅脑、延髓、全脊髓异常信号：获悉更多视神经脊髓炎谱系病？髓鞘少突胶质细胞糖蛋白（myelin-oligodendrocyte glycoprotein,MOG）抗体相关脊髓炎？中枢神经系统脱髓鞘疾病抗体：抗MOG抗体IgG强阳性（滴度1∶100）,AQP4抗体阴性。肌电图：双下肢体感诱发电位异常。诊断为抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白免疫球蛋白G抗体相关疾病（anti-myelin oligodendrocyte glycoprotein-IgG associated disorders,MOGAD）。患者经大剂量激素冲击及丙种球蛋白治疗后症状改善，病情稳定后出院。

建立了加速溶剂萃取(BMS-907351研究购买ASE)-QuEChERS/超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定药食同源性食品中11种双酚类化合物残留的分析方法。样品经ASE萃取,萃取溶剂为乙腈-乙酸-水(89∶1∶10,体积比),萃取温度为80℃,静态萃取时间为6 min,循环2次。萃取液经QuEChERS法净化,采用ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,以甲醇(含0.1%甲酸)和5 mmol/L乙酸铵水溶液(含0.1%甲酸)为流动相进行梯度洗脱,电喷雾电离源正、Gut dysbiosis负模式下同时进行多反应监测(MRM)测定,同位素内标法定量。11种双酚类化合物在0.5～50.0μg/L范围内呈良好线性,相关系数(rselleck~2)不小于0.996 0,检出限为0.1～0.5μg/kg,定量下限为0.3～1.5μg/kg;3个加标水平的回收率为72.4%～108%,相对标准偏差(RSD)为1.7%～15%。该方法操作简单、快速、灵敏度高、重现性好,适用于药食同源性食品中双酚类化合物的同时快速测定。

研究背景:炎症性肠病(IBD)是指一系列肠道炎症相关疾病,包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。其中UC的主要表现是结肠和直肠的慢性非特异性炎症,可涉及结肠和直肠的任何位置,一般从直肠黏膜炎症开始,并持续向结肠近端延伸。目前,UC的发病机制尚不清晰,但是越来越多的研究表明,UC的发生是多因素导致的,这其中主要包括遗传易感性、上皮屏障缺陷、免疫反应失调和环境因素等。而随着UC病程的发展,多数患者甚至可能会出现肠穿孔、中毒性巨结肠、癌变等危及生命的并发症。因此,针对UC开发相应的特效MS-275小鼠药物是目前研究的重要方向。迄今为止,对UC的治疗方式主要是药物治疗,然而,现在应用于临床的药物有时发挥的药效有限,并且有可能引起严重的副作用。目前的临床数据表明,各个年龄段以及性别均有UC的发病,而且其发病率呈逐年上升趋势。在过去30年间,我国UC的发病率随着人民生活水平的提高也逐年升高,而UC作为一种慢性非特异性肠道炎症,具有反复发作、迁延不愈等特点。因此,针对我国目前UC的发病现状,及早开展相关药物和治疗策略的研究是未来研究的重点。天然产物作为一种重要的天然药物资源库,其中含有的生物活性物质能够对多种疾病产生治疗功效。而且天然产物本身具有结构新颖、副作用小等优点,其获取方法也相对简便、经济等,因此,从天然产物中筛选出缓解UC的药物具有良好的应用前景。基于以上观点,找到一种新的可以有效控制UC且毒副作用小的天然药物具有重要意义。在本研究前期工作中利用RAW264.7细胞模型对几种天然产物(白果内酯、马钱苷、人参三醇)进行筛选,通过q RT-PCR实验检测促炎细胞因子的变化,结果发现所选的药物均对脂多糖(LPS)诱导的炎症有效果,但综合考虑药效、药物副作用以及经济性等因素,最终选择天然产物白果内酯作为缓解UC的研究对象。研究目的:探究天然产物白果内酯抑制UC炎症反应的机制,明确白果内酯是否可以通过保护肠上皮屏障及调节肠道菌群的稳态对UC起到治疗作用。实验方法:(1)天然产物的筛选:采用q RT-PCR技术检测天然产物(白果内酯、马钱苷、人参三醇)对LPS诱导的相关促炎细胞因子的影响。(2)体内实验:首先利用葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠UC模型,造模的同时给予白果内酯保护治疗,造模结束后收集小鼠结肠组织及粪便,评估结肠长度、组织学特征等指标。其次对收集的结肠组织进行研磨,收集上清并提取组织蛋白,利用ELISA技术检测上清中促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达,并采用Western Blot对MAPK和AKT/NF-κB通路蛋白进行检测。此外,利用免疫荧光和Western Blot方法对小鼠肠道组织中与肠屏障完整性相关的紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-3进行了检验。最后,对收集的小鼠粪便进行16S r DNA高通量测序分析,检验白果内酯对肠道菌群的影响。(3)体外实验:首先采用LPS对RAW264.7细胞和MC38细胞诱导炎症,同时给予白果内酯保护。按RAW264.7细胞分组提取RNA进行q RT-PCR实验,检验i NOS、COX-2、IL-1β、IL-6和TNF-α等炎症因子的表达变化。然后提取细胞蛋白,利用Western Blot方法对MAPK和AKT/NF-κB通路蛋白进行检测。此外,还利用免疫荧光和Western Blot方法MC38细胞中紧密连接蛋白的表达进行了验证。实验结果:在天然产物筛选实验中,发现白果内酯与马钱苷和人参三醇相比,对促炎细胞因子的抑制作用最好,并endovascular infection且与治疗UC的常用药物5-氨基水杨酸相比没有明显的差异,因此选用白果内酯进行后续实验。在动物实验中,发现与DSS处理的UC模型组小鼠相比,加入白果内酯处理的小鼠结肠长度增加、结肠组织学特征趋于正常化,并且白果内酯可以下调MPO以及促炎细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的表达。加入白果内酯的分组与DSS组相比,MAPK和AKT/NF-κB信号通路的激活被抑制,炎症表现减轻。此外,白果内酯能够上调ZO-1、Occludin和Claudin-3这些紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮屏障的完整性。最后通过对小鼠粪便的测序分析,发现白果内酯可以影响肠道菌群的总体丰富度,促进益生菌种类(包括乳酸杆菌)的增殖,增强有益代谢,维持肠道菌群的稳态,从而达到缓解UC的作用。在细胞水平上,与体内水平的研究一致,白果内酯可以缓解并保护RAW264.7细胞对抗LPS诱导的炎症损伤,可以有效降低相关炎症细胞因子的表达,从而达到抑制炎症的作用。并且与体内实验结果一致,白果内酯可以抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中MAPK和AKT/NF-κB信号通路的激活。此外,在MC38细胞中验证了白果内酯对肠上皮屏障的影响,证明白果内酯可以增加炎症反应后细胞间紧密连接蛋白的表达。结论:综上所述,本实验初步从部分抗炎天然产物中筛选出白果内酯作为后续研究对象,并且发现白果内酯能够通过抑制MAPK和AKT/NF-κB信号通路缓解DSS诱导的小鼠结肠炎及LPS诱导的细胞炎症。同时,白果内酯还能够改善DSS和LPS破坏的肠上皮屏障,维持肠上皮屏障的完整性;并且白果内酯能够改善肠道菌群,重塑菌群构成,促进益生菌的定植,从而起到改善UC的作selleck NMR用。

目的 探讨金丝桃苷对心力衰竭大鼠心脏功能的影响及其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组[6只，氯化钠溶液2 mL/（kg·次）]、模型组[6只，氯化钠溶液2 mL/（kg·次）]、治疗组[6只，金丝桃苷30 mg/（kg·次）]，每日腹腔注射给药1次，连续给药4周。采用彩色超声心动图检查记录大鼠心动图指标；采用醋酸铀-硝Biomass management酸铅双重染色观察心肌组织形态学改变；Western blot检测自噬相关蛋白的表达。采用新生大鼠心肌细胞体外建立心肌细胞损伤模型，分为对照组、异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）模型组、金丝桃苷组及自噬抑制组，免疫荧光染色检测心肌细胞自噬情况。结果 与模型组比较，治疗组大鼠超声心动图指标左心室射PLX4032小鼠血分数（LVEF）、左心室缩短率（LVFS）明显升高（P<0.05），左心室舒张末期室间隔厚度（IVSd）、收缩末期左心室后壁厚度（LVPWs）、收缩期室间隔厚度（IVSs）和舒张期左心室后壁厚度（LVPWd）明显降低（P<0.05）；大鼠心肌病理学改变有明显改善。Westernblot结果显示，治疗组大鼠心肌组织中微管相关蛋白轻链3(microtubuleassociated protein 1 light chain 3,LC3)II/LC3I比例、Beclin-1蛋白表达水平下降（P<0.05）,p62蛋白表达水平增加（P<0.05）。免疫荧光染色显示，对照组、ISO模型组、金丝桃苷组及自噬抑制组细胞中自噬体数分别为（4.3±2.02）个、（39.8±6.03）个、（15selleck NMR.3±6.83）个及（4.79±2.41）个；与ISO模型组比较，金丝桃苷组及自噬抑制组自噬体数显著下降（P<0.05）。结论 金丝桃苷能改善心力衰竭大鼠的心脏功能，其作用机制可能是通过抑制慢性心力衰竭大鼠心肌细胞自噬来实现。

目的：观察经筋推拿联合肌内效贴治疗乳腺癌术后上肢淋巴水肿的临床疗效。方法：将168例乳腺癌术后上肢淋巴水肿患者采用随机数字分表法分为常规治疗组、经筋推拿组、肌内效贴组和经筋推拿联合肌内效贴组（联合组），每组42例。常规治疗组患者采用常规治疗；经筋推拿组患者在常规治疗基础上加用经筋推拿；肌内效贴组患者在常规治疗基础上加用肌内效贴布贴扎治疗；联合组患者在常规治疗基础上进行经筋推拿联合肌内效贴治疗。比较4组患者治疗前后上臂臂围差值变化、临床疗效、治疗前后上肢淋巴流量变化和上肢功KPT-330体外能评定量表（DASH）评分变化。结果：治疗后4组患者上臂臂围差值和DASH评分均低于治疗前（P<0.05），淋巴流量均高于治疗前（P<0.05）；治疗后经筋推拿组、肌内效贴组和联合组患者上臂臂围差值和DASH评分均低于常规治疗组（P<0.05），淋巴流量均高于常规治疗组（P<0.05）；治疗perfusion bioreactor后联合组患者上臂臂围差值和DASH评分均低于经筋推拿组和肌内效贴组（P<0.05），淋巴流量高于经筋推拿组和肌内效贴组（P<0.05）；治疗后经筋推拿组患者上臂臂围差值，淋巴流量和DASH评分与肌内效贴组患者比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;4组临床疗效等级和总有效率比较差异均有统计学意义（P<0.05），联合组总有效率高于常规治疗组（P<0.01）。结论：经筋推拿和肌内效贴均能够selleck合成减轻患者乳腺癌术后上肢淋巴水肿症状，经筋推拿联合肌内效贴治疗效果最佳，且经筋推拿联合肌内效贴能够显著缓解患者淋巴水肿症状，提高临床疗效，改善患者淋巴回流障碍，提升患者上肢肢体功能。

目的 探讨血清肺炎支原体(MP)抗体结合胸部CT征象对小儿肺炎支原体肺炎(MPP)的诊断价值。方法回顾性分析2019年6月CCRG 81045-2020年6月浙江大学附属儿童医院长兴院区儿内科收治的69例MPP和81例链球菌属肺炎(SP)患儿的临床资料，分别纳入MPP组和SP组。收集两组性别、年龄、发热时间和住院时间等资料；比较两组血清支原体-免疫球蛋白M(MP-IgM)和MP-IgG阳性率；Integrated Chinese and western medicine分析两组胸部CT表现，比较两组淋巴结结影和胸腔积液情况、胸部CT征象发生率。结果 MPP组血清MP-IgM、MP-IgG抗体阳性率高于SP组(P<0.05);两组患儿淋巴结结影发生率差异无统计学意义；MPP组患儿胸腔积液发生率、淋巴结结影平均横径和胸腔积液厚度均低于SP组(P<0.05);MPTezacaftor说明书P组患儿胸部CT支气管壁增厚、支气管血管束增厚、网状影征和磨玻璃征等胸部CT征象发生率高于SP组(P<0.05);两组肺气肿和支气管充气征等胸部CT征象发生率差异无统计学意义。结论 血清MP抗体结合胸部CT征象可较好鉴别小儿MPP和SP,具有较高的临床价值。

目的 探讨细菌性肺炎患者病原菌分布及耐药性。方法 选择2018年1月至2020年12月吉林市化工医院收治的1 068例细菌性肺炎患者为研究对象。患者入院后，于用药前采集痰标本并分离培养病原菌。采用全自动细菌鉴定/药物敏感分析系统及配套的药敏卡片进行菌株鉴定和药敏试验。结果 1 068份痰标本中共分离出1 097株病原菌，剔除同一患者痰液中相同菌株最终得到1 058株病原菌，其中革兰Adavosertib体外阳性菌105株(9.92%),革兰阴性菌953株(90.08%)。105株革兰阳性菌中，金黄色葡萄球菌95株(90.48%)、肺炎链球菌8株(7.62%)、无乳链球菌2株(1.90%);95株金黄色葡萄球菌中甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)45株(47.37%),耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)50株(52.63%)。953株革兰阴性菌中，构成比最高的5种为肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌，构成比分别为4Compound 3 MW4.28%(422/953)、13.01%(124/953)、8.50%(81/953)、7.87%(75/953)、 5.25%(50/953)。肺炎克雷伯菌对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南的耐药率(1.0%～1.4%)较低，对头孢唑林的耐药率(33.2%)较高；铜绿假单胞菌对阿米卡星、庆大霉素的耐药率(3.4%～9.5%)较低，对氨曲南的耐药率(37.6%)较高；鲍曼不动杆菌对13种常用抗生素的耐药率(23.8%～45.7%)均较高；大肠埃希菌对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南、哌拉西拉/他唑巴坦的耐药率(0.0%～8.0%)较低，对其他14种常用抗生素的耐药率(34.7%～93.3%)较高；阴沟肠杆菌对阿莫西林/克拉维酸、氨苄西林Mechanistic toxicology、头孢唑啉的耐药率(78.0%～94.0%)较高，对阿米卡星、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率(0.0%～6.0%)较低。MSSA对阿米卡星、阿莫西林/克拉维酸、苯唑西林、利福平、替考拉宁、万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺的耐药率(0.0%～2.1%)较低，MRSA对替考拉宁、万古霉素、奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺的耐药率(0.0%～8.2%)较低。结论 细菌性肺炎病原菌以革兰阴性菌为主，临床上应以药敏试验为指导，加强对细菌性肺炎的合理用药，减少病原菌多重耐药菌的产生。