RAF信号通路

目的 探讨瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡及对琥珀酸脱氢酶D(SDHD)表达水平的影响，分析SDHD对immune architecture肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用的影响。方法 通过流式细胞术观察瑞戈非尼对肝癌细胞凋亡的影响，通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)及蛋白质印迹法(Western blotting)观察瑞戈非尼对SDHD表达的影响。通过CCK-8实验及Edu实验检测SDHD对肝癌细胞增殖的影响，流式细胞术分析SDHD对瑞戈非尼药物作用的影响。通过Western blotting检测SDHD对AKT信号通路的影SCH772984纯度响，流式细胞术分析AKT信号通路抑制剂MK2206对SDHD促瑞戈非尼作用下细胞凋亡的影响。结果 瑞戈非尼促进肝癌细胞凋亡，促进SDHD表达上调(P<0.05);过表达SDHD抑制肝癌细胞增殖(P<0.05),敲减SDHD促进肝癌细胞增殖(P<0.05);MK2206协同SDHD提高肝癌细胞在瑞戈非尼药物作用下的凋亡率(P<0.01)。结论 瑞戈非尼可诱发肝癌PD-0332991浓度细胞凋亡，促进SDHD表达上调；SDHD参与调控肝癌细胞增殖及瑞戈非尼药物作用，提示SDHD可能是肝癌治疗的新靶点。

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MNX1-AS1通过调控miR-218-5p的表达对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 qRT-PCR检测MNX1-AS1和miR-218-5p在肺癌细胞系及肺正常上皮细胞系中的表达；VX-661供应商采用双荧光素酶报告基因实验和RNA pull down实验验证MNX1-AS1和miR-218-5p之间的靶向关系；干扰APrimary biological aerosol particles549细胞中MNX1-AS1和miR-218-5p的表达后，MTT、流式细胞术和Transwell实验检测MNX1-AS1靶向miR-218-5p对癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。结果 与肺正常上皮细胞系相比，肺癌细胞系中MNX1-AS1表达升高，miR-218-5p表达降低(P<0.05);荧光素酶报告基因实验显示，MNX1-AS1可与miR-218-5p结合导致荧光素酶活性显著降低(P<0.05);RNA pull down实验证实miR-218-5p能特异性结合MNX1-AS1(P<0.05);抑制A549细胞中MNX1-AS1的表达后，miR-218-5p水平上调，细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著降低，凋亡率显著升高；与MNX1-AS1抑制剂组相比，共抑制MNX1-ASIpatasertib半抑制浓度1和miR-218-5p的细胞增殖、迁移、侵袭能力升高，凋亡率下降(P<0.05)。结论 MNX1-AS1可以通过靶向下调miR-218-5p的表达影响非小细胞癌的增殖、凋亡、迁移和侵袭。

目的：分析在微球囊压迫下行经皮冠状动脉腔内血管成形术(PTCA)对冠心病患者趋化因子干扰素诱导蛋白-10(IP-10)和心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平的影响。方法：选取2019年1月-2021年12月佳木斯市中心医院收治的80例冠心病患者，按照随机数字表法将患者分成研究组和对照组，每组40例。研究组在微球囊selleck产品压迫下行PTCA，对照组采用经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)。比较两组手术效果。结果：术后1周，研究组左心室射血时间(LVEParamedian approachT)、心脏等容收缩时间(ICT)、血小板聚集率及黏附率均低Gefitinib体内实验剂量于对照组(P<0.05)；术后3 d，研究组血清中IP-10与CK-MB水平均低于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：PTCA能够缓解冠心病患者病症，同时降低血清IP-10与CK-MB因子水平，以改善其体内细胞组织受损程度，加快患者术后病情恢复，具有推广价值。

目的：探讨参芪抑瘤方干预细胞焦亡在抗肿瘤效应中的作用机制。方法：随机抽取10只BALB/c小鼠（雄性）作为正常组，余40只建立肝癌小鼠异位移植瘤模型，建模5d后随机分为模型组、顺铂组（2.5×10~(-3) g·kg~(-1)·3d~(-1)）、参芪抑瘤方组（2.7 g·kg~(-1)·d~(-1)）、联合组（参芪抑瘤方+顺铂）。正常组与模型组以AM-2282供应商等量生理盐水灌胃，连续干预12d，观察各组小鼠一般情况，干预结束后，称量小鼠瘤体质量，计算抑瘤率，采用苏木素-伊红（HE）染色观察肿瘤组织病理变化；检测小鼠肝功能指标谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平）；原位末端标记法（TUNEL）检测小鼠肿瘤组织细胞DNA损伤情况；免疫组化（IHC）、免疫荧光（IF）及免疫印迹法（Western blot）检测瘤组织中Nod 样受体蛋白3（NLRP3）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）蛋白表达水平；酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测瘤组织中白细胞介素-1β（IL-1β）和白细胞介素-18（IL-18）的含量。结果：与正常组比较，模型组小鼠精神状态差，倦卧懒动，毛色暗淡；肝功能检测血清ALT、AST水平明显升高（P<0.01）。与模型组相比，各给药组小鼠精神状态明显好转，且各给药组均可不同程度抑制瘤体生长，肿瘤质量均下降，其中联合组抑瘤率最强(P<0.01);HE染色示，模型组小鼠肿瘤组织病理形态学病变显著，各给药组均有一定程度改善，以参芪抑瘤方组及联合组细胞核，溶解破裂更为明显；肝功能检测中，参芪抑瘤方组及联合组小鼠血清ALT、AST水平均下降显著（P<0.01）；各给药组炎症因子IL-1β和IL-18均下降（P<0.01，P<0.05），其中参芪抑瘤方组IL-1β和IL-18下降趋势最为明显（P<0.01），联合组IL-1β含量减少（P<0.05）。TUNEL染色示各给药组干预后TUNEL染色阳性降低(P<0.05)，以顺铂组和参芪抑瘤方组降低显著(P<0.01)；WB、免疫组化、免疫荧光在肿瘤组织中检测发现，各给药组NLRP3、Caspase-1Medicare Provider Analysis and Review、GSDMD蛋白表达水平均下降（P<0.05，P<0.01）。与顺铂组相比，参芪抑瘤方组和联合组小鼠精神状态佳，瘤体形态规则，联合组小鼠肿瘤质量下降(P<0.05)。肝功能检测中参芪抑瘤方组ALT和AST水平下降（P<0.05），但联合组ALT和AST水平下降无统计学意义；参芪抑瘤方组和联合组IL-1 β和IL-18均下降（P<0.05，P<0.01），以参芪抑瘤方组最为明显（P<0.01）；免疫组化中，联合组小鼠肿瘤组织中GSDMD蛋白表达显著降低（P<0.01）；免疫荧光检测发现参芪抑瘤方组NLRP3在肿瘤组织中表达显著降低（P<0.01）；WB检测示，参芪抑瘤方组及联合组NLRP3蛋白表达水平下降显著（P<0.01），联合组Caspase-1蛋白表达水平下降明显（P<0.01）；但GSDMD蛋白表达下降不明显，无统计学意义。结论：参D-Lin-MC3-DMA细胞培养芪抑瘤方联合顺铂具有明显抑瘤作用，其抗肿瘤作用可能是通过下调NLRP3/Caspase-1/GSDMD炎性焦亡途径抑制细胞焦亡，缓解肝癌小鼠的炎症反应，达到抗肿瘤的作用。

目的 分析乳腺肿瘤外科手术中采用保留乳房+乳房重建的临床应用价值。方法 选取2019年4月-2022年1月医院50例乳腺肿瘤外科治疗患者作为研究对象，根据组间年龄、病程等基本资料均衡可比的原则分为观察组与对照组，每组25例。对照组患者采用改良根治术治疗，观察组患者采用保留乳房+乳房重建，分析两组患者预后情况、美观情况及患者生活质量。结果 外科手术后，观察组患者不良预后发生率与对T immunophenotype照组比较，差异无统计学意义（P>0.05）；观察组患者乳房美观优良率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；观察组患者生活质CX-5461说明书量各维度得分高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论 乳腺肿瘤外科治疗中采用保留乳房+乳房重建，能够最大化维持患者的乳房外观，保留其女性特征，并且预后效果与传统手术方法无明显差异，selleck NMR可提高患者生活质量。

分别具有β~-、α、俄歇电子以及内转换电子衰变的放射性核素，在放射性药物研发以及临床评估中得到广泛应用，其中~(177)Lu放射性治疗药物的研究在近年来得到了迅猛的发展，文献报道数量持续增长，~(177)Lu放射性治疗药物引发了放药研究领域的强烈关注。本文对近两年~(177)Lu标记的抗体、多肽、纳米颗粒，以及小分子放射性治疗药物临床phosphatidic acid biosynthesis前及临床研究最新进展进行综述。其中处于临床前研究的药物通过药物设计增强了靶向性，改进了药代动力学及生物性质；处于临床研究阶段的药物具有良好的安全性，对肿瘤发挥明显抑制作用，对延长患者生存期及提高患者的生存质量起到积极作用；对已有临床用Protein Tyrosine Kinase抑制剂药方式进行补充，如核素联合治疗、放化免疫联合治疗、诊疗一体化以及分批次用药方式；对临床用药的人体计量学数据进行补充，如~(177)Lu-RM2在GRPR前Adavosertib价格列腺癌治疗中的人体剂量学。

研究背景与目的:乳腺癌在女性肿瘤中发病率第一,病死率位居第二,三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)属于乳腺癌众多分型中难治的类型,TNBC因缺乏雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor2,Her2),所以对经典的内分泌治疗和Her2靶向药物治疗无效,一旦发生远处转移、化疗药耐药或抵抗,可GDC-0973半抑制浓度供选择的治疗方案十分有限,中位生存期不足18个月,严重威胁患者生命。虽然近年来免疫检查点抑制剂的治疗,使得部分肿瘤患者从中获益,但根据多中心随机对照试验显示,TNBC患者对PD-1抗体的治疗效果难以令人满意,所以目前临床中TNBC仍以化疗和手术治疗为主。近年来,随着单细胞测序技术的开展及针对肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)的深入研究,人们逐渐发现TNBC难治除了与肿瘤细胞自身特性相关之外,还与TME中复杂细胞组分相互串扰有关。TNBC的TME细胞组分包括:肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)、癌症相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast,CAFs)、内皮细胞和构成肿瘤脉管系统的周细胞、炎症细胞及骨髓衍生细胞等,其中TAMs和CAFs是TME的主要组成。TAMs通过刺激血管生成、释放促炎细胞因子、抑制细胞毒性T细胞反应及重塑细胞外基质(extracellular matrix,ECM)参与化疗抵抗和癌症的发展。CAFs在TME中可产生胶原,构建起物理屏障,保护肿瘤细胞免受药物杀伤。α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)是CAFs活化标志物之一,在乳腺癌中α-SMA阳性细胞在肿瘤基质区域的高表达,往往提示与预后不良相关。令人意外的是,在胰腺导管癌模型中,靶向α-SMA~+CAFs表现出免疫抑制性、肿瘤呈低分化性和小鼠生存期缩短。因此充分的了解肿瘤细胞和相关基质之间的双向通讯,才能有望提升肿瘤治疗敏感性和改善患者预后。骨桥蛋白(osteopontin,OPN)是由SPP1基因编码的一种多功能磷酸糖蛋白,可由T细胞、B细胞、NK细胞、髓细胞、成骨细胞、骨细胞、上皮细胞和神经元等多种细胞产生,广泛参与人体生理与病理过程。OPN在多种癌症中均有过度表达,包括肺癌、前列腺癌、乳腺癌、结直肠癌和肝癌。既往研究表明,OPN可通过与整合素和/或CD44受体结合后,具有维持肿瘤细胞干性、招募巨噬细胞浸润、重编程正常成纤维细胞向CAFs分化和促进肿瘤远处转移等作用。但在免疫系统健全的TNBC模型中,肿瘤细胞来源OPN对CAFs的调控,是否完全依赖于整合素或CD44?OPN除了与成纤维细胞的直接作用,是否还通过其他信号通路或介体参与CAFs的活化?靶向肿瘤细胞OPN是否能够缓解肿瘤基质纤维化程度,同时增加肿瘤对化疗药的敏感性?这些问题尚不十分清楚,还需进一步探索。因此本研究旨在通过构建敲除OPN的TNBC细胞株,探索肿瘤细胞来源OPN与肿瘤基质纤维化间的调控机制,并通过体内实验验证OPN与CAFs的串扰对化疗药抵抗的影响,从而为未来靶向肿瘤基质纤维化的新药开发或治疗方案提供策略支持。研究方法:1、根据肿瘤纤维化程度的差异,选取四种小鼠肿瘤细胞系进行转录组测序分析,结合Gene Expression Profiling Interactive Analysis(GEPIA)数据库中人类乳腺癌数据结果,明确OPN与肿瘤纤维化间的相关性。2、利用CRISPR-Cas9系统构建稳定敲除OPN的小鼠TNBC细胞系,并通过体外实验观察敲除OPN对4T1肿瘤细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。3、利用慢病毒构建稳定过表达OPN的小鼠黑色素细胞瘤B16-F0细胞株,并通过体外实验评价过表达OPN对B16-F0细胞增殖、凋亡及迁移能力的影响。4、建立小鼠4T1和B16-F0模型,通过流式细胞术及免疫组化染色检测,观察敲除或过表达肿瘤细胞OPN对TAMs比例和肿瘤基质纤维化的影响,同时分析荷瘤小鼠脾脏巨噬细胞及外周血中单核细胞比例。5、通过巨噬细胞耗竭动物模型,利用流式细胞术、实时荧光定量PCR、蛋白质免疫印迹、免疫荧光及免疫组化染色等检测方法,探索肿瘤细胞来源OPN和TAMs对肿瘤基质纤维化的调控关系。6、利用流式分选仪分选出小鼠4T1-WT肿瘤中TAMs(CD45~+CD11b~+F4/80~+)和CAFs(CD45~-CD90.2~+),探索TAMs对CAFs活化及迁移的作用机制,并通过蛋白质免疫印迹实验进行验证,最后通过体外凋亡实验和体内实验观察4T1-WT及4T1-SPP1-KO肿瘤对多西他赛的敏感性。研究结MRTX1133化学结构果:1、在4种小鼠肿瘤中,4T1细胞OPN表达量最高且肿瘤基质纤维化程度最重,与人TNBC样本中OPN与CAFs生物标志物(ACTA2、S100A4和FAP)表达趋势吻合,证明可用4T1模型研究OPN与肿瘤基质纤维化间的关系。2、利用CRISPR-Cas9成功构建4T1-SPP1-KO细胞株,敲除OPN不影响4T1细胞体外增殖速度和总凋亡比例,但4T1-SPP1-KO细胞迁移能力较4T1-WT细胞减低。3、利用慢病毒构建稳定过表达OPN的B16-SPP1-OE细胞株,过表达OPN未增加B16-F0细胞的体外增殖、总凋亡比例及迁移能力。4、在4T1模型中,4T1-SPP1-KO相对4T1-WT肿瘤中TAMs比例明显减少,同时肿瘤基质纤维化程度得到显著缓解。在B16-F0模型中,B16-SPP1-OE较B16-EV肿瘤内TAMs比例增加,且肿瘤基质纤维化程度加重。5、利用Clodronate-Liposomes清除小鼠体内巨噬细胞后,可显著抑制4T1-WT体内肿瘤生长速度、降低TAMs比例,并缓解肿瘤基质纤维化程度,但体内巨噬细胞耗竭,并不能进一步减低4T1-SPP1-KO荷瘤小鼠肿瘤内TAMs比例及肿瘤基质纤维化程度,说明肿瘤细胞来源OPNSingle molecule biophysics是4T1肿瘤促进TAMs浸润的主要因素,且OPN对肿瘤基质纤维化的调控是通过TAMs介导的间接作用。6、通过迁移实验发现TAMs可通过CCL5-CCR5信号轴招募CAFs迁移,通过蛋白质免疫印迹明确TAMs通过TGF-β1/c-Rel信号刺激CAFs中α-SMA、成纤维细胞特异蛋白1(FSP1)和平足蛋白(PDPN)的表达上调;体外CAFs和肿瘤细胞共培养后对多西他赛诱导的凋亡存在抵抗,体内实验发现敲除肿瘤细胞OPN可提高4T1肿瘤对多西他赛的敏感性。研究结论:本研究通过构建4T1-SPP1-KO细胞株发现,敲除肿瘤细胞OPN可显著减慢肿瘤生长速度、降低TAMs比例及缓解肿瘤纤维化程度,并通过耗竭荷瘤小鼠巨噬细胞的体内实验证实,肿瘤细胞来源OPN是促进TAMs浸润的主要因素,TAMs可通过CCL5-CCR5信号轴招募CAFs迁移,同时TAMs在OPN的作用下通过TGF-β1/c-Rel信号通路刺激CAFs过表达α-SMA、FSP1和PDPN,继而促进4T1肿瘤对多西他赛产生凋亡抵抗。综上,在TME中这些复杂的信号串扰共同造成TNBC病情进展。

目的：比较紫杉醇联合顺铂(TP)和紫杉醇联合多柔比星(AP)两种方案在三阴性乳腺癌(TNBC)新辅助化疗(NAC)中的临床疗效，以及分析病理完全缓解与预后的关系。方法：回顾性分析2018年1-8月就诊于沧州市中心医院的46例三阴性乳腺癌患者的临床资料，依据治疗差异分为含铂组(26例)与非含铂组(20例)。比较两组的手术时长、出血量、术后并发症发生率、客观缓解率(ORR)、病理完全缓selleck ABT-199解(pCR)率；分析pCR与3年无病生存(DFS)率和总生存(OS)率的关系。结果：含铂组手术时长[(44.96±7.56)min vs(80.50±8.61)min]短于非含铂组，出血量[(128.65±9.03)ml vs(245.50±8.91)ml]少于非含铂组，差异有统计学意义(P<0.05)；含铂组并发症发生率(11.5% vs 45.0%)低于非LBH589半抑制浓度含铂组(P<0.05)，含铂组ORR (76.9% vs 35.0%)、pCR率(42.3% vs 15.0%)高于非含铂组，差异均有统计学意义(P<0.05)。NAC后，完全缓解(CR)17例，部分缓解(PR)10例，疾病稳定(SD)14例，疾病进展(PD)5例，pCR率为30.4%，3年DFS率和OS率分别为41.3%和56.5%；其中pCR患者的3年DFS率和OS率分别为64.3%和78.6%，明显高于非pCR患者的31.3%和46.9%(P<0.05)。单因素分析发现，pCR和患者3年内DFS率与OS率均有关(P<0.05)，多因素分析发现，pCR是3年DFS率的独立影响因素(P=0.042)。生存分析发现，46例患者中发生死亡20例(pCR 3例，非pCR 17例)，无病生存19例。全部患者3年无病生存时间11～36个月，其中含铂组为(31.15±6.40)个月，长于非含铂组的(23.00±8.35)个月(PWomen in medicine<0.05)；含铂组的3年DFS率为61.5%，高于非含铂组的15.0%(P<0.05)。全部患者总生存时间16～44个月，其中含铂组为(36.73±3.65)个月，长于非含铂组的(29.60±8.95)个月(P<0.05)；含铂组的OS率为76.9%，高于非含铂组的30.0%(P<0.05)。结论：TNBC对TP方案较敏感，患者近期疗效及预后较好；获得pCR患者预后较好，pCR可作为预后观察指标。

目的 探究沉默微小RNA-146a(miR-146a)对颈动脉狭窄模型大鼠血管平滑肌细胞活性的影响及机制。方法 48只SPF级SD大鼠平均分为4组，其中空白组不做任何处理，模型组、过表达组、沉默组构建颈动脉狭窄模型，做miR-146a慢病毒滴定，采用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-146a基因表达Compound 3细胞培养量，采用流式细胞仪检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA)、同型半胱氨酸(Hcy),四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测血管平滑肌细胞增殖水平，采用细胞划痕实验检测血管平滑肌细胞迁移能力，采用Western印迹法检测L型钙通道蛋白(CaV1.2)、CaV1.3及Toll样受体(TLR)4/髓样分化因子(MyD88)/核转录因子(NF)-κB信号通路蛋白表达量。结果 与过表达组相比，沉默组miR-146a基因表达量、增殖数、TLR4/MyD88/NF-κB信号通路蛋白表达量明显降低(P<0.05)。与过表达组相比，沉默组CaV1.2、CaV1.3、NMDA、Hcy表达水平、迁移数明显升高(P<0.05)。结论 沉默miR-146a可能作用于TLR4/MyD88/NF-κB信号通路，调控TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表MS-275生产商达量，显Biokinetic model著提升颈动脉狭窄模型大鼠血管平滑肌细胞活性。

目的 观察芪参益气滴丸在冠心病支架置入术后合并抑郁及焦虑患者中的情绪改善效果。方法medication characteristics 将2019年5月至2020年12月90例首次在天津市胸科医院接受支架置入治疗，且合并轻中度焦虑/抑郁状态的心绞痛患者采用随机数字表法分为对照组和治疗组，每组45例，对照组给予冠心病常规治疗，治疗组在对照组基础上加服芪参益气滴丸，治疗8周，分别评价患者健康问卷抑郁分量表（PHQ-9）、躯体化和躯体形式障碍分量表（PHQ-15）和广泛性焦虑障碍量表（GAD-7），并测定各个时间点患者的血清髓过氧化物酶（MPO）、5-羟色胺（5-HT）及脑源性神经营养因子（BDNF）水平。结果 治疗4周后，PHQ-9,GAD-7和PHQ-15评分较治疗前降低，且治疗组PHQ-9评分明显低于对照组[（4.6±3.8）比（6.2±4.1）,P=0.048]；治疗8周后，治疗组PHQ-9[(2.0±3.0)比（5.0±4GSK126化学结构.0）,P<0.001],GAD-7[(2.4±2.9)比（4.7±3.9）,P=0.002]评分均低于对照组。亚组分析显示，服用芪参益气滴丸8周，治疗组60岁以上患者的PHQ-15评分明显低于对照组60岁以上患者的PHQ-15评分[（1.8±2.9）比（3.6±3.4）,P=0.034]。两组患者经支架置入治疗后BDNF[(34.1±3.1)μg/L比（30.2±3.2）μg/L,P<0.001]及5-HT[(29.2±3.1)ng/mlselleckchem Barasertib比（25.3±3.1）ng/ml,P<0.001]水平显著升高，MPO水平显著降低[（318.4±63.5）U/L比（378.4±67.1）U/L,P<0.001]，而且经芪参益气滴丸治疗组上述指标改善更加明显。所有治疗组及对照组患者随访期间无严重不良反应。结论 芪参益气滴丸能改善冠心病支架患者的焦虑抑郁障碍，并能改善老年患者的躯体不适，可能与循环系统的MPO,BDNF及5-HT改善有关。