RAF信号通路

α-L-鼠李糖苷酶属于糖苷水解酶,可特异性催化如芦丁、橙皮苷、柚皮苷、人参皂苷等天然糖苷末端的α-L-鼠李糖基。作为一类重要的生物催化剂,其广泛存在于自然界,在食品、医药、美容、化工等行业具有极高的应用价值。然而,目前缺乏高效、特异性的、针对α-L-鼠李糖苷酶催化活性的评价方法,且缺少稳定性好,催化活性高的α-L-鼠李糖苷酶。急需开发高效的建库策略以快速获得性能优良的α-L-鼠李糖苷酶,从而促进其在工业生产中的发展与应用。本研究首先对4种柑橘类黄酮二糖苷橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、芸香柚皮苷及其对应苷元橙皮素与柚皮素在酸性、碱性和甲醇三种条件下进行250 nm-550 nm波长扫描。结果显示柑橘类黄酮二糖苷与其对应苷元在碱性条件下具有光谱差异性,即苷元在碱性条件下于320 nm处有特征峰。因此,可通过α-L-鼠李糖苷酶对柑橘类黄酮二糖苷脱鼠李糖基将其转化为黄酮葡萄糖苷,偶联β-D-葡萄糖苷酶催化黄酮葡萄糖苷生成对应苷元。利用紫外-可见分光光度法测定320 nm处吸收值对苷元进行定量,从而实现对α-L-鼠李糖苷酶催化柑橘类黄酮二糖苷活性的评价。基于以上研究,本课题选取了一系列肠道细此网站菌源α-L-鼠李糖苷酶HFM-RhaA、HFM-RhaC、HFM-Rha78、BtRha78A、BtRha78D联合嗜热、高活性β-D-葡萄糖苷酶Tn Bgl1A-DM,通过紫外-可见分光光度法快LEE011体内实验剂量速评价其对4种柑橘类黄酮二糖苷的底物选择性。研究结果表明:HFM-RhaA、HFM-Rha78和BtRha78D对新橙皮苷和柚皮苷的催化活性较高(偏好水解α-1,2糖苷键),BtRha78A可特异性水解橙皮苷和芸香柚皮苷(α-1,6糖苷键),而对新橙皮苷和柚皮苷无水解活性。HFM-RhaC对4种柑橘类黄酮二糖苷均可水解,其中,催化橙皮苷和芸香柚皮苷的能力较强(偏好水解α-1,6糖苷键)。随后,固定酶浓度与反应时间,通过高效液相色谱法检测以上5个α-L-鼠李糖苷酶对4种柑橘类黄酮二糖苷的催化活性,色谱峰图显示结果与上述一致,证实了紫外-可见分光光度法的可行性。其次利用新型半理性分子改造策略—六密码子组合突变(Six Codons Combinatorial Mutagenesis,SCCM)对来源于多形拟杆菌的α-L-鼠李糖苷酶BtRha78A进行分子改造,以提高其对橙皮苷的催化活性。基于BtRha78A三级结构、同源序列比对等相关信息的分析,确定底物结合口袋入口处的三个突变靶标基序。利用全质粒PCR构建六密码子组合突变体文库、紫外可见-分光光度法初筛、高效液相色谱法终筛,经测序获得4个水解能力高于野生型的优秀突变体,分别是TM1-6-F5、TM1-6-H6、TM1-7-G1、TM1-8-F9。高效液相色谱法检测野生型和突变体对橙皮苷的生物转化率与反应时间的关系。其中,TM1-6-F5催化橙皮苷的活性最高,当反应时间为20 min时,转化率已达50.67%,而野生型在反应时间为60 min时,对橙皮苷的生物转化率仅有53.97%。最后,对优秀突变体的酶动力学常数、热稳定性、底物选择性等参数进行测定。结果显示,突变体的各项动力学常数均大于野生型、TM1-6-F5的催化效率最高,k_(cat)/K_M是野生型的1.4倍。4个突变体的热稳定性相对野生型有所下降,其中,TM1-6-F5、TM1-8-F9在37℃下的热稳定性较microbiota dysbiosis好,保温240 min仍具有95%以上的酶活。此外,通过底物选择性的测定发现,4个突变体对目标底物橙皮苷、芦丁、pNPR的催化活性相较于野生型均有不同程度的变化。

目的:结合实际生产以及现所存在问题,优选出最佳桑黄饮片生产工艺,为桑黄饮片生产工艺提供依据,提高产率,降低生产成本,为桑黄饮片提供质量保障。从桑黄多糖的提取方法、粗多糖的纯化分离、均一多糖的理化性质、结构表征方面来研究桑黄多糖类成分,初步探究桑黄多糖抗炎活性,为桑黄多糖活性成分及桑黄药用资源综合开发利用提供理论基础。方法:1.采用单Infected aneurysm因素实验设计法,以润制温度、润制时间为考察因素,以桑黄饮片多糖、总酚、麦角甾醇以及饮片颜色为评价指标,通过综合评分法,优选桑黄饮片最佳生产工艺。2.采用水提醇沉-除蛋白-冷冻干燥得到的瓦尼桑黄粗多糖(SHP),依次经DEAE-52纤维素离子交换、葡聚糖凝胶Sephadex G-100柱色谱进行分离纯化,得到均一多糖。凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(GPC-RI-MALS)测定其绝对分子量;离子色谱(IC)测定其单糖组成;甲基化分析、核Cobimetinib分子量磁共振波谱、红外光谱(FT-IR)、扫描电子显微镜(SEM)对桑黄均一多糖结构进行分析。3.采用CCK-8法检测桑黄均一多糖对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7细胞活力影响;利用ELISA试剂盒测定桑黄均一多糖对LPS诱导的RAW264.7细胞一氧化氮(NO)及炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)释放量的影响。结果:1.桑黄饮片最佳生产工艺:原药材,除去杂质,洗净,40℃润软,切厚片,40℃干燥,筛去碎屑。2.经水提醇沉-除蛋白-冷冻干燥后得到桑黄粗多糖(SHP)9.538 g,采用DEAE-52纤维素离子交换柱分离纯化得到SHP-W、SHP-1及SHP-2三个多糖组分。进一步采用葡聚糖凝胶层析Sephadex G-100柱纯化得到SHP-W-1、SHP-1-1及SHP-2-1三个均一多糖组分。通过凝胶色谱-示差-多角度激光光散射(GPC-RI-MALS)、单糖组成、甲基化分析、红外光谱(FT-IR)、核磁共振波谱(NMR)及扫描电子显微镜(SEM)对SHP-W-1、SHP-1-1及SHP-2-1结构进行初步分析。SHP-W-1的重均分子量(Mw)、数均分子量(Mn)和均分子量(Mz)分别为16.075 k Da、15.506 k Da和16.478 k Da,多分散系数(Mw/Mn)为1.037,SHP-W-1由岩藻糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖和核糖组成,Swww.selleck.cn/products/SB-431542HP-W-1有17种糖苷键。SHP-1-1的重均分子量(Mw)、数均分子量(Mn)和均分子量(Mz)分别为333.599 k Da、43.427k Da和3516.544 k Da,多分散系数(Mw/Mn)为7.682;SHP-1-1由岩藻糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、甘露糖醛酸组成;SHP-1-1有25种糖苷键。SHP-2-1的重均分子量(Mw)、数均分子量(Mn)和均分子量(Mz)分别为563.032 k Da、59.641 k Da和4205.062 k Da,多分散性(Mw/Mn)为9.44;SHP-2-1由岩藻糖、阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、木糖、甘露糖、甘露糖醛酸组成;SHP-2-1有23种糖苷键。SHP-W-1、SHP-1-1和SHP-2-1都是一种球形分子。3.CCK-8法检测结果显示SHP-W-1在10～150μg/m L范围内呈现剂量依赖性,SHP-1-1和SHP-2-1在10～100μg/m L范围内呈现剂量依赖性。随着浓度的增加,对细胞增殖活性的作用越明显,三种多糖均能降低LPS诱导RAW264.7巨噬细胞中NO的含量,抑制TNF-α、IL-6及IL-1β的分泌,表明表现出良好的抗炎活性。结论:本研究考察了桑黄饮片产业化生产最佳工艺,并通过水提醇沉、除蛋白透析等方法得到了桑黄粗多糖;在此基础上对粗多糖进行了进一步分离纯化和结构表征,初步探究其体外抗炎活性。本研究为桑黄多糖活性成分及桑黄药用资源综合开发利用提供理论基础。

目的 建立一种无需前增菌快速检测牡蛎中单核细胞增生李斯特菌的PCR方法。方法 利用β-环糊精和膨润土包被活性炭处理牡蛎样品，去除聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)反应抑制因子，以单核细胞增生李斯特菌特异基因inlB为靶基因，建立无需样品前增菌的PCR快速检测方法。同时验证该方法的特异性、灵敏度及实用性参数，并评估该方法所用试剂在冷冻保存后的稳定性与实用性。结果 建立的PCR方法对130株目标菌和63株非目标菌的检测特异性为100%,灵敏度达10 CFU/25 g。该方法无需前增菌，4 h即可完成检测。PCR方法和国标方法对实际样品中单核细胞增生李斯特菌的检出率(均为13%)和活菌检测率(均Chemical-defined medium为100%)一致，即符合率100AY-22989供应商%。此外，该方法所用试剂在-20℃冷冻条件下可稳定保存至少1年。结论 建立的PCR方法特异性强、灵敏度高，可快速、准确检测CL13900供应商出牡蛎中的单核细胞增生李斯特菌。

目的:为进一步提高植物雌激素毛蕊异黄酮的溶解性和生物利用度,对毛蕊异黄酮分子结构进行化学修饰,并从中筛选出抗Erastin卵巢癌活性更强的新型毛蕊异黄酮衍生物。方法:基于药物拼接原理,以毛蕊异黄酮为原料,在4-二甲氨基吡啶(DMAP)、三乙胺的作用下,通过与各种酰氯缩合得到毛蕊异黄酮衍生物H1-H10,并采用红外光谱、核磁共振、质谱进行结构验证;采用CCK8法检测各目标化合物在体外对于卵巢肿瘤细胞株增殖的影响,并从中筛选出抗卵巢肿瘤效果最好的H10为研究对象进行后续研究。采用平板克隆实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3克隆形成能力的影响;采用流式细胞术检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3细胞周期和凋亡的影响;采用划痕实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞株A2780、SKOV3迁移能力的影响;采用Transwell实验检测目标化合物H10对卵巢癌细胞A2780、SKOV3侵袭能力的影响;采用TMT定量蛋白质组学技术检测目标化合物H10作用于卵巢癌细胞SKOV3相关的差异蛋白;采用Western Blot实验检测目标化合物H10对铁死亡蛋白GPX4和周期蛋白CCKN1B、CDK1、CDC20和CCNB1表达水平的影响。结果:以毛蕊异黄酮为先导化合物,共合成了10个毛蕊异黄酮衍生物H1-H10,并采用~1NSC 119875体内实验剂量H NMR、~(13)C NMR、IR、MS等手段对目标化合物进行结构表征。H1-H10对于卵巢癌细胞增殖均表现出不同程度的抑制作用,其中以目标化合物H10作用于卵巢癌细胞株SKOV3、A2780的IC50值最低(SKOV3,IC50=2.64μM;A2780,IC50=5.23μM),且优于毛蕊异黄酮和阳性对照他莫昔芬,而H10其对人正常卵巢上皮细胞IOSE80的IC50值要高于他莫昔芬(17.51μM vs 15.29μM)。相一致地,H10可呈浓度依赖性显著抑制卵巢癌细胞SKOV3、A2780的克隆形成能力。同时,目标化合物H10可诱导卵巢癌细胞A2780、SKOV3的凋亡,并将癌细胞的生长阻滞于G0/G1期。另一方面,目标化合物H10呈浓度依赖性抑制卵巢癌SKOV3、A2780细胞的迁移和侵袭。进一步TMT定量蛋白组学分析表明,H10处理组和对照组间存在88个差异蛋白(上调21个,下调67个)。GO(Gene Ontology)分析表明,差异蛋白主immune rejection要定位于细胞核、细胞质、染色体乘客复合体,涉及大分子复合物结合、ATP结合、酶结合等分子功能,主要参与核分裂、细胞周期、有丝分裂等生物学过程。KEGG分析显示差异蛋白主要参与了9条信号通路,其中细胞周期和卵母细胞减数分裂相关通路中差异表达蛋白数量相对较多。H10呈浓度依赖性显著抑制铁死亡蛋白GPX4和周期蛋白CCKN1B、CDK1、CDC20和CCNB1的表达。结论:通过对毛蕊异黄酮的结构修饰,合成制备了H1-H10多个目标化合物,并筛选出抗卵巢癌活性最佳的毛蕊异黄酮衍生物H10。该衍生物可显著抑制卵巢癌细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,降低癌细胞迁移和侵袭能力,其作用机制可能涉及对癌细胞中铁死亡和细胞周期等信号通路的调控。

目的:1.观察调气平萎方治疗慢性萎缩性胃炎(肝胃郁热证)的临床疗效。2.研究调气平萎方治疗慢性萎缩性胃炎的潜在活性成分和作用靶点,为其进一步的动物试验和细胞机制试验提供理论基础。方法:1.调气平萎方治疗肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎的临床观察。选择2021年6月-2023年1月在门诊符合标准的患者64例,采用随机数字表法分组,分为试验组和对照组,每组32例。对照组采用达立通颗粒治疗,每天3次,每次6g。试验组采用调气平萎方治疗,每日1剂,水煎服,总CMV infection疗程为12周。在治疗前后对比患者的中医证候积分、胃镜及病理检查,对检查结果进行分级评分对比,评价其临床疗效。2.调气平萎方治疗肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎的网络药理学研究。通过TCMSP数据库筛选调气平萎方的主要活性成分和对应的靶点,使用Uniprot数据库对所有靶点标准化处理。在Genecards、OMIM、Dis Ge NET数据库搜索得出疾病靶点。使用Cytoscape 3.9.1软件建立“药物-活性成分-作用靶点”网络,将中药活性成分和疾病的交集靶点建立蛋白质相互作用网络图分析得到PPI网络图,并使用Cytoscape的插件centiscape2.2按照一定的条件筛选出治疗的核心靶点,将交集靶点导入到David6.8数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果:1.临床观察(1)基线比较:两组患者在性别、年龄、病程、治疗前中医证候总积分和中医证候单项积分、胃镜分级、病理组织评分方面对比,结果均无显著差异(P>0.05),具有可比性。(2)中医证候积分比较:试验组和对照组治疗后的各项证候积分和总积分较治疗前比均有降低(P<0.05),试验组在胃脘疼痛痞满、胃中嘈杂、反酸、口干口苦的治疗效果方面优于对照组(P<0.01),在大便干燥、烦躁易怒方面二者疗效相当(P>0.05)。(3)中医证候疗效比较:试验组总体有效率为86.67%,对照组总体有效率为66.67%,试验组疗效优于对照组(P<0.05)。(4)胃镜分级疗效比较:试验组有效率为76.67%,对照组有效率为53.33%,试验组优于对照组(P<0.05)。(5)病理积分比较:试验组和对照组患者萎缩、肠化病理积分均下降(P<0.05),试验组优于对照组(P<0.05),两组患者异型增生积分均无明显下降(P>0.05)。(6)病理疗效比较:试验组治疗萎缩、肠化、异型增生的总体有效率分别为73.33%、60%、10%,对照组治疗萎缩、肠化、异型增生的总体有效率分别为53.33%、36.67%、3.33%,说明试验组萎缩和肠化疗效优于对照组(P<0.05),异型增生的疗效两者没有明显差别(P>0.05)。2.网络药理学通过网络药理学研究可发现调气平萎方有效化学成分129个,去除相同的有效成分和靶点后共得到108个有效成分,246个靶点。涉及到了99个治疗慢性萎缩性胃炎的潜在作用靶点,Cytoscape拓扑分析筛选得到AR、RELA、STAT1、AKT1、MAPK14等18个核心靶点,槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚、豆甾醇、异鼠李素5个核心成分。生物信息学富集分析得到1Y-27632采购70条通路,主要与癌症通路、AGE-RAGE信号通路、脂质和动脉粥样硬化通路、PI3K/Akt信号通路等方面有关。结论:1.调气平萎方能显著改善肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎患者的临床症状。2.调气平萎方可以改善胃镜黏膜下表现和提高治疗病理萎缩、肠化有效率。3.调气平萎方可能通过AR、RELA、STAT1、AKT1、MAPK14、癌症通路、AGE-RAGE信号通路、脂质和动脉粥样硬化通路、PI3K/Akt信号通路起到治疗慢性萎缩性胃炎的作用,该研究揭示了调气平萎方多成selleck合成分、多靶点、多通路的作用机制,为调气平萎方的临床应用及动物实验和细胞机制试验提供了新思路。

目的:1.观察调气平萎方治疗慢性萎缩性胃炎(肝胃郁热证)的临床疗效。2.研究调气平萎方治疗慢性萎缩性胃炎的潜在活性成分和作用靶点,为其进一步的动物试验和细胞机制试验提供理论基础。方法:1.调气平萎方治疗肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎的临床观察。选择2021年6月-2023年1月在门诊符合标准的患者64例,采用随机数字表法分组,分为试验组和对照组,每组32例。对照组采用达立通颗粒治疗,每天3次,每次6g。试验组采用调气平萎方治疗,每日1剂,水煎服,总CMV infection疗程为12周。在治疗前后对比患者的中医证候积分、胃镜及病理检查,对检查结果进行分级评分对比,评价其临床疗效。2.调气平萎方治疗肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎的网络药理学研究。通过TCMSP数据库筛选调气平萎方的主要活性成分和对应的靶点,使用Uniprot数据库对所有靶点标准化处理。在Genecards、OMIM、Dis Ge NET数据库搜索得出疾病靶点。使用Cytoscape 3.9.1软件建立“药物-活性成分-作用靶点”网络,将中药活性成分和疾病的交集靶点建立蛋白质相互作用网络图分析得到PPI网络图,并使用Cytoscape的插件centiscape2.2按照一定的条件筛选出治疗的核心靶点,将交集靶点导入到David6.8数据库进行GO功能和KEGG通路富集分析。结果:1.临床观察(1)基线比较:两组患者在性别、年龄、病程、治疗前中医证候总积分和中医证候单项积分、胃镜分级、病理组织评分方面对比,结果均无显著差异(P>0.05),具有可比性。(2)中医证候积分比较:试验组和对照组治疗后的各项证候积分和总积分较治疗前比均有降低(P<0.05),试验组在胃脘疼痛痞满、胃中嘈杂、反酸、口干口苦的治疗效果方面优于对照组(P<0.01),在大便干燥、烦躁易怒方面二者疗效相当(P>0.05)。(3)中医证候疗效比较:试验组总体有效率为86.67%,对照组总体有效率为66.67%,试验组疗效优于对照组(P<0.05)。(4)胃镜分级疗效比较:试验组有效率为76.67%,对照组有效率为53.33%,试验组优于对照组(P<0.05)。(5)病理积分比较:试验组和对照组患者萎缩、肠化病理积分均下降(P<0.05),试验组优于对照组(P<0.05),两组患者异型增生积分均无明显下降(P>0.05)。(6)病理疗效比较:试验组治疗萎缩、肠化、异型增生的总体有效率分别为73.33%、60%、10%,对照组治疗萎缩、肠化、异型增生的总体有效率分别为53.33%、36.67%、3.33%,说明试验组萎缩和肠化疗效优于对照组(P<0.05),异型增生的疗效两者没有明显差别(P>0.05)。2.网络药理学通过网络药理学研究可发现调气平萎方有效化学成分129个,去除相同的有效成分和靶点后共得到108个有效成分,246个靶点。涉及到了99个治疗慢性萎缩性胃炎的潜在作用靶点,Cytoscape拓扑分析筛选得到AR、RELA、STAT1、AKT1、MAPK14等18个核心靶点,槲皮素、β-谷甾醇、山奈酚、豆甾醇、异鼠李素5个核心成分。生物信息学富集分析得到1Y-27632采购70条通路,主要与癌症通路、AGE-RAGE信号通路、脂质和动脉粥样硬化通路、PI3K/Akt信号通路等方面有关。结论:1.调气平萎方能显著改善肝胃郁热证慢性萎缩性胃炎患者的临床症状。2.调气平萎方可以改善胃镜黏膜下表现和提高治疗病理萎缩、肠化有效率。3.调气平萎方可能通过AR、RELA、STAT1、AKT1、MAPK14、癌症通路、AGE-RAGE信号通路、脂质和动脉粥样硬化通路、PI3K/Akt信号通路起到治疗慢性萎缩性胃炎的作用,该研究揭示了调气平萎方多成selleck合成分、多靶点、多通路的作用机制,为调气平萎方的临床应用及动物实验和细胞机制试验提供了新思路。

目的 探讨预防性抗凝治疗在特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy, IMN)患者中的疗效及安全性。方法 回顾性收集2019年12月～2021年12月在武汉大学人民医院就诊且病理确诊的197例IMN患寻找更多者的临床资料，根据是否进行预防性抗凝治疗分为预防性抗凝组(n=99)与未预防性抗凝组(n=98),根据抗凝方案差异，预防性抗凝组分为低分子肝素组、低分子肝素+直abiotic stress接口服抗凝剂(direct oral anticoagulants, DOACs)组及华法林组。比较组间实验室检查及病理资料的差异，以及使用抗凝药物6个月后，组间患者的疗效、血栓及出血事件的差异。结果 与未预防性抗凝组比较Cobimetinib分子式，预防性抗凝组男性比例、年龄、24h尿总蛋白、D-二聚体、血总胆固醇较高，白蛋白(albumin, ALB)、凝血酶Ⅲ活性较低(P<0.05)。两组患者在肾脏病理方面比较，差异无统计学意义。未预防性抗凝组患者的血栓事件比例高于预防性抗凝组(12.2%vs 3.0%,P=0.030),血栓部位以下肢静脉血栓为主；预防性抗凝组出血事件比例高于未预防性抗凝组(15.1%vs 2.0%,P=0.003),出血部位以皮肤黏膜及牙龈出血为主。血栓高风险组(ALB<25g/L)中，未预防性抗凝组血栓事件比例高于预防性抗凝组(9.2%vs 1.0%,P=0.022)。3组比较，华法林组出血比例高于低分子肝素组和低分子肝素+DOACs组(33.3%vs 5.7%vs 16.3%,P=0.042)。结论 无论何种预防性抗凝治疗方案(低分子肝素、华法林或DOACs)均可以安全有效地降低IMN患者发生血栓事件风险。

目的:基于SLC7A11/GPX4信号通GW-572016路探讨密点麻蜥对人胃癌MKN45细胞发生铁死亡的影响。方法:selleck产品选择SD大鼠制备含药血清,将MKN45细胞随机分为空白对照组(10%空白血清)、5-FU含药血清(10%)阳性对照组、密点麻蜥含药血清低(5%)、中(10%)、高(20%)浓度组。CCK-8法检测MKN45细胞的存活率;Transwell法检测MKN45细胞的迁移及侵袭能力;激光共聚焦检测细胞内二价铁离子(Fe~(2+))水平;试剂盒检测细胞内LPO水平;流式细胞术检测细胞内ROS水平;qPCR法检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53 mRNA表达的影响;Western Blotting检测密点麻蜥对MKN45细胞中SLC7A11、GPX4、P53蛋白表达的影响。结果:与空白对照组比较,密点麻蜥含药血清中、高浓度组MKN45细胞存活率、迁移及侵袭能力显著降低,Fe~(2+)、ROS水epigenetic drug target平显著升高,P53、SLC7A11、GPX4 mRNA及蛋白表达显著降低,高浓度组LPO水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:密点麻蜥可能通过抑制SLC7A11/GPX4信号通路,同时促进细胞内Fe~(2+)、LPO的积累,从而诱导MKN45细胞发生铁死亡,抑制其增殖、迁移及侵袭。

机体自由基水平过高导Liraglutide致的氧化损伤是引起人类癌症、糖尿病、动脉硬化及神经退行性病的主要原因之一,抗氧化肽可以清除自由基从而具有预防或治疗疾病的作用。因此,抗氧化剂的开发已经成为当前的研究热点。榛蘑学名为蜜环菌,其蛋白质含量丰富,是生物活性肽的良好来源之一。目前常以食用为主,关于其功能成分的研究主要集中在多糖上,蛋白及肽的研究鲜有报道。本研究先从榛蘑中制得榛蘑蛋白,再用超声辅助风味蛋白酶水解得到榛蘑蛋白肽;利用超滤、葡聚糖凝胶柱层析纯化榛蘑蛋白肽后,以DPPH自由基清除、羟基自由基清除、ABTS自由基清除Properdin-mediated immune ring和总还原力为指标,测定了榛蘑蛋白肽及经逐级分离纯化得到的各榛蘑肽组分的抗氧化活性;通过液质联用对高活性榛蘑抗氧化肽组分进行结构鉴定;进行肽的固相合成筛选较高抗氧化活性的榛蘑肽序列;进一步研究榛蘑抗氧化肽对氧化损伤的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)的保护作用。主要结果如下:1.采用碱提和超声分步法提取榛蘑蛋白:结果表明,分步提取方法可大幅提高蛋白提取率。碱提法的条件为:料液比为1:47,碱提pH为10.0,碱提时间为1.55 h,温度为80℃。离心收集上清液后,对废渣再进行超声处理,处理条件为:超声功率为200 W,超声时间为15 min,料液比为1:47,超声pH为9.0,超声温度为30℃,此条件下榛蘑蛋白的提取率为76.59%。榛蘑蛋白质沉淀的方法为先进行等电点沉淀(pI=3.7),后用90%的饱和硫酸铵盐析。经冷冻干燥后得榛蘑蛋白干粉。2.超声辅助风味蛋白酶水解制备榛蘑肽:结果表明,超声可以提高风味蛋白酶的水解度及水解产物的抗氧化活性。响应面优化后得出最佳水解条件为:在底物浓度为4%条件下,超声功率为200 W,超声处理时间为15 min,然后加入风味蛋白酶,pH调为7.0,酶浓度为3.5%,水解温度为41℃,水解时间为3 h,此时,蛋白质水解度达到16.32%。经冷冻干燥后得榛蘑肽干粉。3.榛蘑肽的分离纯化、结构鉴定及其抗氧化活性分析:结果表明,与总肽相比,超滤中得到的<3 kD的组分抗氧化活性更高,其DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率、ABTS自由基清除率和总还原力分别达到92.37%、96.75%、97.68%和1.26。对<3 kD的肽组分进行Sephadex G-25柱层析,发现组分A2具有更高的抗氧化活性,其DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率、ABTS自由基清除率和总还原力分别达到97.01%、100%、100%和1.62。采用液质联用和从头测序对组分A2进行结构鉴定。结合BIOPEP数据库筛选出7条肽进行固相合成,利用体寻找更多外抗氧化指标进行筛选得到抗氧化活性高的2条肽段,分别为肽3(FDHEW)和肽6(WDPVH)。4.细胞试验检测榛蘑肽的抗氧化活性:结果表明,5种榛蘑抗氧化肽(总肽、<3 kD、A2、合成肽3、合成肽6)对氧化损伤后的SH-SY5Y细胞具有良好的保护作用。在浓度为2 mg/mL时,与总肽和<3 kD相比,A2组分的细胞活力最高。在浓度为200μM时,固相合成的肽3的细胞活力高于肽6。与模型组相比,5种榛蘑抗氧化肽均能提高细胞SOD、CAT、GSH-Px和ATPase活力。在浓度为2 mg/mL条件下,A2作用下的细胞GSH-Px和CAT活力最高;<3 kD作用下的细胞SOD活力最高;总肽作用下的细胞ATPase活力最高。在200μM浓度下,肽3作用下细胞的SOD、CAT和GSH-Px活力均高于肽6,而肽6的ATPase活力高于肽3。

目的：探索祛浊selleck Tezacaftor化瘀方治疗痛风性关节炎作用及机制。方法：通过TCMSP、GeneCards、DisGeNET、MalaCards、DAVID6.7等数据库，筛选出祛浊化瘀方的核心成分及核心靶点。通过GEO数据库获得痛风性关节炎模型小鼠基因数据，筛选样本之间的差异表达基因，GO分析以及KEGG信号通路富集分析共同的差异基因。分析痛风性关节炎组与正常组当中免疫细胞浸润情况，比较差异相关性。与网络药理学信号通路结果进行对比验证，综合得到的结果以确定作用靶点，并通过动物实验验证。结果：网络确认细节药理学发现IL-1β、IL-6、TNF-α是与痛风性关节炎相关密切的核心靶点。基于GEO数据库的差异表达基因分析，白细胞迁移、趋化，产生细胞因子、中性粒细胞迁移在内的多个生物过程，经由NF-κB路径的TNF-α信号通路等多个炎症信号通路参与痛风性关节炎，与网络药理学所得结果基本一致。通过免疫细胞浸润分析发现固有免疫细胞如中性粒细胞、巨噬细胞是主要的参与痛风性关节炎炎症反应的免疫细胞类型。动物实验结果显示：祛浊Classical chinese medicine化瘀方能够降低痛风性关节炎模型组织局部IL-1β、TNF-α、IL-6表达，减少中性粒细胞胞外诱捕网的形成。结论：祛浊化瘀方可能通过多成分、多靶点和多通路抑制炎症反应防治痛风性关节炎。