PLOD1在结直肠癌中的表达及生物学作用的研究

目的:本研究应用生物信息学技术、二维液相-色谱质谱联用技术(LC-MS)检测结直肠癌肿瘤组织、癌旁组织筛选出差异蛋白,选择上调表达的PLOD1作为目标蛋白,通过免疫蛋白印迹实验(western blot,WB)、免疫组化中的石蜡包埋切片技术,在组织层面对生信、质谱结果加以验证。构建PLOD1上调表达及下调表达的细胞株,通过WB(细胞制样)、实时荧光定量PCR(RT-q PCR)实验分别在细胞层面、RNA层面多角度验证构建成功。又通过细胞功能实验观察不同表达量的PLOD1对结直肠癌细胞生物学功能的影响,从而探究PLOD1对结直肠癌发展的影响。方法:1.查阅Timer数据库和GEPIA数据库确定PLOD1在结直肠癌中表达情况;通过CbiTalazoparib抑制剂oportal数据库获得PLOD1的共表达基因;检索STRING数据库获得PLOD1相关的蛋白关系网络;登录COSMIC网站获得PLOD1在结直肠癌中的基因突变情况。2.通过LC-MS、Western Blot及免疫组化实验检测结直肠癌患者组织,分析PLOD1在结直肠癌组织中的表达情况。3.以SW620为目标细胞系,构建PLOD1上调表达和下调表达的瞬转细胞株,Western Blot和RT-q PCR从细胞和基因水平验证各组细胞株中PLOD1的表达情况。通过细胞增殖实验和划痕实验检测PLOD1蛋白表达量的变化对结直肠癌细胞生物学功能的影响。结果:1.PLOD1在包括结直肠癌在内的多种肿瘤组织中上调表达;且与P3H1基因关联性最强。PLOD1在结直肠癌基因突变中最常见的类型是错义突变及同义突变。2.LC-MS建立的结直肠癌蛋白差异表达谱发现PLOD1在结直肠癌组织中上调表达,通过Western Blot及免疫组织化学技术也验证了这一结果。3.成功构建瞬时转染的PLOD1上调表达、下调表达及相应的阴性对照细胞系,RT-qPCR及Western Blot验证构建成功。细胞增殖实验及细胞划痕实验表明上调表达的PLOD1可促进细胞的增殖与迁Docetaxel移,下调表达的PLOD1可抑制细胞的增殖与迁移。结论:1.PLOD1在结直肠癌组织中的表达高于其癌旁组织。2.PLOD1上调表达可促进结直肠癌细胞的增殖和迁移功能。Panti-hepatitis BLOD1有潜力作为结直肠癌筛查及诊断的生物标志物。