【目的】本研究旨在探究环指蛋白41(Ring Finger Protein 41,RNF41)在胆管癌发生发展中的作用,并阐明RNF41调控胆管癌进展的分子机制,为丰富胆管癌的治疗提供策略。【方法】通过生物信息学、Western blotting及免疫组织化学分析RNF41在胆管癌患者的肿瘤组织及癌旁正常组织中m RNA和蛋白的表达;利用临床数据分析RNF41对胆管癌患者预后生存的影响,以及RNF41与肿瘤临床特征的关系;构建RNF41 si RNA转染HCC9810、RBE和HUCCT1细胞后,利用CCK-8、Ed U、克隆形成实验及Western blotting实验分析RNF41对胆管癌细胞的增殖作用;进一步采用Transwell实验、划痕实验及标志蛋白检测分析RNF41对胆管癌细胞的迁移和侵袭作用,Western blotting实验检测RNF41对胆管癌细胞上皮间质转化的作用;裸鼠成瘤实验、Western blotting实验及免疫组织化学染色分析RNF41在动物体内肿瘤生长中的作用;随后质谱分析和免selleckchem Blebbistatin疫沉淀技术检测与RNF41相互作用的因子;体外泛素化实验、Western blotting实验、免疫沉淀、免疫荧光共定位等实验用于深入探究RNF41在胆管癌中的潜在分子调控机制。【结果】RNF41 m RNA及蛋白在胆管癌肿瘤组织中的表达水平显著高于相应的癌旁组织,RNF41的表达增加与CHOL组织学分级和肿瘤淋巴结转移阶段密切相关,且RNF41的高表达与CHOL患者的不良预后密切相关。RNF41能促进肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭及细胞EMT。而通过在裸鼠体内进行异体肿瘤移植实验及检测标志蛋白发现,RNF41敲低抑制了胆管癌细胞在裸鼠体内的皮下成瘤能力,EMT相关蛋白检测结果与体外细胞实验分析一致。免疫沉淀结合质谱分析发现RNF41与四肽重复结构域1(TetratricDocetaxel供应商opeptide repeat domain1,TTC1)结合。免疫沉淀-Western blotting实验结果显示RNF41通过促进其K6连接的多泛素化来稳定TTC1蛋白。通过Western blotting实验发现,磷酸化的RAF、ERK或MEK水平在RNF41 OE的HCC9810/RBE/HUCCT1细胞明显上调,使用TTC1 si RNA处理后,磷酸化RAF、ERK或MEK的蛋白水平则降低,并且TTC1沉默部分逆转了RNF41过表达对增殖和迁移的影响。【结论】RNF41能促进胆管癌的发生发展并且与肿瘤分期、淋巴结转移等临床病理特征及患者的不良预后密切相关;下调RNF41可以抑制胆管癌细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和肿瘤形成能力;RNF41通过介导TTC1的泛素化调控Ras/Orthopedic infectionERK信号通路参与了CHOL的发生发展。