TRPA1调控肿瘤相关成纤维细胞异质性介导结直肠癌转移的机制研究

目的:肿瘤相关成纤维细胞(Cancer-associated fibroblast,CAF)在结直肠癌转移中起到了促进作用,结合已有文献发现存在炎症相关癌症成纤维细胞和肿瘤相关肌成纤维细胞两种不同亚型,其中TRPA1(Transient receptor potential Ankyrin1,TRPA1)在两种CAF亚型中高表达。不同亚型的肿瘤相关成纤维细胞功能和表型具有差异,对结直肠癌转移起促进作用。本研究拟探讨:(1)TRPA1是否介导结直肠癌CAF促进肿瘤转移;(2)不同亚型的CAF细胞中TRPA1的作用机制探索;(3)能否通过抑制TRPA1调控CAF来抑制结直肠癌肿瘤转移。方法:收集人结直肠癌组织提取原代CAF,通过Western blot和鬼笔环肽实验进行验证。细胞TRPA1敲低后运用WB实验、免疫荧光实验(IF)、RT-q PCR进行验证。通过Transwell实验、蛋白质免疫印迹技术、Flou-4AM实验、RT-q PCR、鬼笔环肽、胶原收缩、明胶酶谱观察TRPA1敲低后CAF细胞功能变化。体内实验运用脾注射肝转移小鼠模型,验证化疗药物联用TRPA1抑制剂是否能够通过。结果:(1)在炎症样肿瘤相关成纤维细胞(Inflammatory-like cancer-associated fibroblast,i CAF)中,通过体外实验敲低TRselleck HPLCPA1基因后发现能抑制i CAF的功能,并且验证是通过MAPK/NADPH/NF-κB信号通路来起到抑制作用的。(2)在肌成纤维样肿瘤相关成纤维细胞(Myofibroblast-like cancer-associated fibroblast,my CAF)中,通过体外实验敲低TRPA1基因后发现mselleckchem RepSoxy CAF的胶原功能降低从而抑制肿瘤细胞侵袭,并且验证主要通过Ca N/NFATc3信号通路抑制Ca N/NFATc3信号通路起到了重要作用。(3)在体外模型中end-to-end continuous bioprocessing,i CAF与结直肠癌成纤维细胞模拟肿瘤转移模型,通过脾注射肝转移研究结直肠癌转移,发现TRPA1特异性抑制剂HC030031联合奥沙利铂能够抑制结直肠癌肝转移。(4)运用my CAF与结直肠癌成纤维细胞模拟肿瘤转移模型,通过脾注射肝转移研究结直肠癌转移,发现TRPA1特异性抑制剂HC030031联合奥沙利铂能够抑制结直肠癌肝转移。结论:在结直肠癌转移中,TRPA1通过介导CAF细胞起到重要作用。研究确定相关机制:在my CAF中抑制TRPA1通过Ca N/NFATc3信号通路影响CAF细胞功能;在i CAF中抑制TRPA1通过MAPK/NADPH/NF-κB信号通路影响CAF细胞功能。通过体内实验脾注射肝转移模型验证TRPA1抑制剂联合奥沙利铂均能显著抑制肿瘤转移。